青霉菌产漆酶的研究及在木质素降解中的应用.docVIP

青霉菌产漆酶的研究及在木质素降解中的应用 　　摘要：采用单因素和正交试验对青霉菌产漆酶的优化条件进行研究，并测定了青霉菌对芦苇木质素的降解率。结果表明，最佳培养条件为麦麸17 g/L，酵母膏2 g/L，Al3+ 0.7 g/L，KH2PO4 3 g/L，30 ℃， pH 6.0摇瓶培养192 h，在此条件下漆酶的酶活提高了11.39倍，7 d内该菌能使芦苇木质素降解23.63%。 　　关键词：青霉菌；漆酶；产酶条件；木质素降解 　　中图分类号：TS201.3文献标识码：A文章编号：0439-8114（2014）10-2379-04 　　Studies on Laccase from Penicillium and Its Application in Lignin Degradation 　　LU Qing-hua，XING Meng-lan，CAI Lu 　　（1. Institute of Bioengineering and Technology， Inner Mongolia University of Science and Technology， Baotou 014010） 　　Abstract： The conditions of Penicillium for laccase production were optimized with single factor and orthogonal experiment. The degradation rates of the produced laccase for lignin from reed were determined. The results showed that the activity of laccase increased 11.39 times when Penicillium was cultured 192 h under 30℃ and pH of 6.0 with wheat bran of 17 g/L， yeast extract of 2 g/L， Al3+ of 0.7 g/L， KH2PO4 of 3 g/L. The lignin in reed could be degradated 23.63% in seven days by this Penicillium. 　　Key words： Penicillium； laccase； fermentation condition； lignin degradation 　　基金项目：教育部“春晖计划”项目（Z200721201020）；内蒙古自治区高等学校科学研究项目（NJzy08233）；内蒙古包头市科技攻关项目（2008y100222） 　　漆酶（Laccase）由日本学者Yoshida[1]于1883年从漆树中分离得到，其是一种很有潜力的含铜的多酚氧化酶，具有强大的催化能力[2-4]，被称为“绿色催化剂”[5]。随着生物造纸技术的日益成熟和研究的深入，漆酶在造纸工业上的研究和应用也逐步深入，漆酶可以选择性的降解木质素，避免损伤纤维素和半纤维素。漆酶的高产菌株为白腐菌，白腐菌对木质素具有很好的降解优势和降解选择性，50 d时木质素的降解率为33.9%～55.4%[6]。吴薇等[7]研究表明黄孢原毛平革菌和变色栓菌Sp1在24 d 时对麦草的木质素降解率达到30%～65%。由于白腐菌特有的降解木质素的功能，在生物制浆、生物漂白、废水处理等的应用都得到了重视[8]。但是，由于菌种产酶较低，降解周期长，很难用于大规模生产。因此，今后研究的主要手段是筛选降解效果好、生长周期短的菌种，并通过对产漆酶菌发酵条件的优化来提高漆酶的活性和产量。 　　本研究通过单因素和正交试验方法，对筛选的具有较高漆酶产量的青霉菌株进行了培养条件的优化， 同时探索了该漆酶在木质素降解方面的性质。 　　1材料与方法 　　1.1菌种 　　由实验室筛选得到，初步鉴定为青霉菌，命名为QM-001。 　　1.2培养基 　　1.2.1基础培养基PDA培养基： 马铃薯200 g，葡萄糖 20 g，蛋白胨5 g，蒸馏水定容至1 L，pH自然，1×105 Pa灭菌30 min。 　　1.2.2基础产酶培养基马铃薯200 g，葡萄糖 20 g，蛋白胨5 g，KH2PO43 g，MgSO4?7H2O 1.5 g，蒸馏水定容至1 L，pH自然，1×105 Pa灭菌30 min。 　　1.3方法 　　1.3.1产酶培养500 mL 的三角瓶装200 mL产酶培养基，接种量为5%， 30 ℃、160 r/min振荡培养，培养过程中观察菌丝生长状况，测定酶活。漆酶活性测定以A