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维生素 B2 的含量测定 （荧光光度法） OBJECTIVE 1 学习和掌握荧光光度分析法测定VB2的基本原理和方法。 2 学习荧光分光光度计的使用方法。 PRINCIPLE 荧光：物质的分子经紫外光照射后，发射出的较原来吸收 光的频率低、波长长的光。不同的荧光物质有各自 的特征激发光波长和荧光波长，利用物质的荧光现 象进行定性、定量分析的方法称为荧光分析法。 对同一物质而言，若εbC 1（ 0.05），即溶液的组成 量度极稀时， 荧光强度F与溶液的组成量度C有以下关系： F=2.303ФI0εbC Ф：荧光效率 I0 ：入射光强度 ε: 荧光物质的摩尔吸光系数 b：样品池的厚度 当I0和b固定时， F=K’C ? ? ? 0 F C C样品 F=K’C VB2的C（HAc）=0.1mol/L溶液在紫外光照射下，发出黄 绿色荧光，可直接进行荧光测定。 pH=2.9, λ激发 370nm，467nm λ发射 527nm VB2 ，核黄素 PROCEDURE 1 维生素B2系列标准溶液的配制 0.1mol/L HAc 准确吸取VB2贮备液 (125?g/ ml ) 0.50ml 定容 50.0ml 摇匀 1.25?g/ml VB2 操作液 1) VB2 操作液的配制 编号 1 2 3 4 5 6 7(待测液) VB2 操作液(ml) 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 5.00(样品) 用0.1mol/L Hac稀释至(ml) 25.00 2) VB2系列标准溶液及待测液的配制 2 标准曲线绘制 1）仪器预热（激发光波长360nm，荧光波长510nm）。 2）以系列标准液6号液为标准，调节荧光强度F为90左右 。 3）固定荧光测定条件不变。分别测定下列标准液1~6号液（由稀倒浓）的荧光强度F，并记录。 4）以溶液组成量度为横坐标，相对荧光强度F，为纵坐标，绘制标准曲线。 0 F C 3 样品测定 1）在相同的荧光测定条件下，测定待测液的荧光强度F。 2）从标准曲线上查出对应的组成量度，再乘以5，得样品 中维生素B2的组成量度。 C待测 0 F C DATA 编号 1 2 3 4 5 6 7 (待测液) V2 操作液(ml) 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 5.00(样品) 0.1mol/L Hac稀释至(ml) 25.00 荧光强度F 相对荧光强度F’ QUESTION DISCUSSION 实验结果：CVB2 (待测）= ； CVB2 (样品）=
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