实验十一血糖浓度测定.docVIP

实验十一 血糖浓度测定 1目的 掌握血糖浓度测定的原理和方法。 2原理 动物血液中的糖主要是葡萄糖，其含量较恒定。健康家免的血糖水平为80～120毫克％。用硫酸锌和氢氧化钠除去被检血中的蛋白质制成无蛋白血滤液。当将血滤液与标准铁氰化钾溶液共热时，—部分铁氰化钾还原成亚铁氰化钾，并与锌离子生成不溶性化合物。 向混合液中加入碘化物后，用硫代硫酸钠溶液滴定所释放的碘。即可知剩余的铁氰化钾量。血糖越多，剩余的铁氰化钾越少，所消耗的硫代硫酸钠也越少。硫代硫酸钠溶液用量与血糖浓度的关系可以由经验确定下来的数字表查出。此过程可用反应式表示如下： （1）还原反应： K3Fe CN 6十糖→K4Fe CN 6+糖的氧化产物。 2K4Fe CN 6+3ZnSO4 →K2Zn3Fe CN 6]2十3K2SO4 由于产生不溶性化合物，糖的还原反应进行得比较完全。 （2）用碘量法测定剩余的标准K3Fe CN 6溶液。 2K3Fe CN 6十2KI十8CH3COOH→2H4Fe CN 6十I2十8CH3COOK 2Na2S2O3十I2→2NaI十Na2S4O6 3器材 （1）微量滴定管 （2）电炉 （3）50×90毫米大试管 （4）小试管 （5）100ul移液枪 （6）铁架台、漏斗、滤纸、玻璃棒、烧杯 4试剂 （1）0.45％硫酸锌溶液 新鲜配制 （2）0.1摩尔／升氢氧化钠溶液 新鲜配制 （3）0.005摩尔／升铁氰化钾碱性溶液 用分析天平称化学纯铁氰化钾1.65克、溶解后加入预先准备好的锻制无水碳酸钠10.6克，定容到1升。将溶液放在棕色瓶内，于阴暗处保存。 （4）氯—锌—碘溶液 取硫酸锌50克及纯氯化钠250克，定容到1升，作为母液。临用前根据所需用的试剂量加入碘化钾，使它在混合液中的浓度为25克/升。 （5）标准0.005摩尔／升硫代硫酸钠溶液 临用时由标准0.1摩尔／升硫代硫酸钠溶液稀释。 （5）3％醋酸溶液 不应含铁 （5）1％可溶性淀粉溶液 1克可溶性淀粉溶于10毫升沸水中，然后加入到90毫升饱和氯化钠溶液中。此溶液可作为大多数碘量法滴定的指示剂，可长期保存。 （6）新鲜兔血 5操作步骤 （1）取二个试管，各加入0.45％硫酸锌5毫升及 0.1摩尔／升氢氧化钠溶液1毫升，此时产生氢氧化锌胶状沉淀。 （2）用微量移液枪地吸取新鲜兔血0.1毫升，加入一个装有氢氧化锌的试管中。另一试管中加入0.1毫升蒸馏水为对照管。 （3）将两个试管同时放人沸水浴中。准确煮沸四分钟后将二试管的内容物用滤纸分别过滤到两个大试管内，用蒸馏水冲洗沉淀和原来的试管两次，每次都用水3毫升。将溶液并在一起。 （4）向每个试管内用吸管精确地加入标准铁氰化钾碱性溶液2毫升，一同放入沸水浴中煮沸15分钟。 （5）冷却后分别加入氯－锌—碘溶液3毫升及3％醋酸2毫升，混匀，各加淀粉液两滴。用标准硫代硫酸钠溶液滴定至蓝色消失为止。 （6）血糖含量的计算： 根据血糖换算表将样品滴定值和对照滴定值折合成糖值。将此两糖值的差乘以1000，即为100毫升血液中含葡萄糖毫克数。 下表列出0.005摩尔／升硫代硫酸钠溶掖的用量 毫升 和血糖含量 毫克／毫升 的换算关系。 表中最左边纵行中的数字是滴定时消耗0.005摩尔／升硫代硫酸钠溶液的毫升数的整数及小数后第一位。表中最上的横行代表其小数后第二位数字，表中交叉点的数字为0.1毫升血液中所含葡萄糖的毫克数。 6注意事项 试剂用量必须准确；反应物过滤时不能损失。 操作1不一定能产生明显的氢氧化锌胶状沉淀；滴定管是否漏液、留有气泡；滴定过程要规范。 硫代硫酸 钠的毫升数 0.00 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07 0.08 0.09 0.0 0.385 0.382 0.379 0.376 0.373 0.370 0.367 0.364 0.361 0.358 0.1 0.355 0.352 0.350 0.348 0.345 0.343 0.341 0.338 0.336 0.333 0.2 0.331 0.329 0.327 0.325 0.323 0.321 0.318 0.316 0.314 0.312 0.3 0.310 0.308 0.306 0.304 0.302 0.300 0.298 0.296 0.294 0.292 0.4 0.290 0.288 0.286 0.284 0.282 0.280 0.278 0.276 0.274 0.272 0.5 0.270 0.268 0.266 0.264 0.262 0.260 0.259 0.257 0.255 0.253 0.6 0.251 0.249 0.247 0.245 0.243 0.241 0.240 0.238 0.2