头孢菌素C高产菌株发酵及发酵液预处理的研究.docVIP

头孢菌素C高产菌株发酵及发酵液预处理的研究 摘 要：本文对头孢菌素C高产菌株发酵工艺以及发酵液的预处理方法进行了介绍与研究，在对发酵工艺进行改良与优化后，有效提高了产品的产量。在发酵的过程中，需要观察发酵液粘度的变化情况，还要了解哪些物质会阻遏产物生成以及头孢菌素C的生物合成。通过多次试验发现，菌丝高度分化后，其浓度对效价增长并没有影响。在本次研究中，确定了最佳的超滤温度以及pH值，还总结出了发酵液超滤后最佳的清洗方法。 关键词：头孢菌素C；发酵；超滤；预处理 头孢菌素C是一种常见的抗生素，其代谢产物具有广谱抗菌的作用，在确定头孢菌素C的化学结构后，了解到其是一种不同于青霉素的内酰胺抗生素。在对头孢菌素C的合成途径以及代谢进行了研究后，发现其无法直接应用在临床上，属于半合成产品，具有良好的治疗效果，是一种有效的抗感染药物。头孢菌素在抗感染药物中占有较大的比重，其每年的销售数额也比较大，并且有时会超过青霉素，其具有良好的发展前景，为了提高制药企业生产效益，还需要对发酵工艺进行优化，降低生产的成本。 1 头孢菌素C简介 头孢菌素C是一种两性化合物，其分子中有两个羧基、一个氨基，在中性和偏酸性下会呈现出酸性，而且会与碱金属合成形成盐类。头孢菌素C与其他头孢菌素在弱碱的条件下会发生水解，在酶催化水解反应下无法生存稳定的头孢噻唑基，在反应的过程中还会导致二氢噻嗪环破裂，形成以侧链为主的衍生物。头孢菌素C的结构式如图1所示。 头孢菌素C是一种头孢烯类，其主要是作用机制是抑制细菌细胞壁的合成，在作用的过程中产生的毒性非常低，其一种疗效较高的抗生素，所以在临床中有着广泛的应用。在医疗事业发展不断加快的同时，头孢菌素的发展却异常缓慢，新的头孢菌素产品在不断减少，临床研究的品种也只有几种而已。相关医学工作者对头孢类半合抗产品在不断的研究，而且在对化合物进行改造后，突破了抗细菌感染的范畴，达到了蛋白酶抑制剂的功效，在癌症治疗以及白内障疾病的治疗中都发挥出了重大的作用。 2 头孢菌素C菌种的选育 采用发酵法生产药物时，需要选择良好的菌种，采用自然分离得到的菌种一般无法满足工业生产的需要，所以需要采用菌种选育的方式对菌种的特性进行改良，从而提高微生物发酵的产量，促进微生物发酵工业的快速发展。做好菌种的选育，可以有效的提高发酵产量，也可以保证产品的质量，增加产品的品种，改良发酵工艺技术。在头孢发酵生产中，获得优良的菌株主要是采用自然选育以及诱变育种的方法，为了提高菌种的纯度，还会不断的进行自然选育，避免菌种出现衰退的情况，达到稳定生产的效果。有的生产单位会引进纯化高产菌株，这些都是保证菌株质量的有效方法。 3 头孢发酵的控制参数 在头孢发酵的过程中，需要控制好物理、化学、生物等过程的参数。物理参数是指控制好发酵过程的温度以及酶反应速率；控制好发酵罐压力，避免收到污染影响菌体的代谢；控制好通气比，控制好发酵过程的耗氧情况；控制好发酵过程搅拌器的转动速度，考虑菌丝的剪切影响；还要控制粘度，通过测量培养液的黏度，即可确定细胞的浓度。化学参数是指控制好发酵液的pH值，其与菌体生长以及产物合成有着较大的关系；工作人员还要控制好溶解氧的浓度，观察溶氧浓度的变化，可以了解产生菌对氧利用的规律，还要发现发酵过程中出现的异常情况。生物参数是指观察菌丝的形态，其可以衡量种子的质量，也可以控制发酵过程的代谢。菌体浓度的控制对微生物发酵也有着重大影响，只有控制好这些参数，才能保证头孢菌素C发酵液预处理达到理想的情况。 4 头抱菌素C发酵液的预处理 最初头抱菌素发酵液采用传统的板框或真空转鼓过滤机进行过滤。首先使发酵液冷却到15℃以下再用稀硫酸酸化至PH2.5-3.0，放置一段时间，使发酵液中残余的蛋白质变性沉淀，同时使其中的DCPC内酷化，而易于和头C分离。随着膜技术的发展及在工业生产中的地应用，板式超滤膜被应用到头抱菌素C发酵液的提取分离过程中。目前，国内生产厂家采用分离头抱菌素C发酵液主要是板式超滤膜。它能一次截留发酵液中的菌丝体、蛋白质和悬浮离子等杂质，简化操作工艺流程、减轻劳动强度，由于不采用助滤剂从而减轻了环境污染，同时滤液质量和产品收率也得到提高。但是头抱菌素C发酵液成份复杂、料液粘稠，批次之间差异较大，尤其随着工艺不断优化，给膜分离带来通量衰减快、污染严重、使用寿命短等一系列问题。 近年来，随着工业上超滤技术的广泛应用，无机材料制成的陶瓷膜获得了快速发展。它具有化学稳定性好，能耐酸、耐碱、耐有机溶剂；机械强度大，可反向冲洗；抗微生物能力强；耐高温；孔径分布窄，分离效率高等特点。目前已经有生产厂家开始尝试把陶瓷膜用于头抱菌素C发酵液的过滤。 5 发酵工艺的优化 菌丝量是菌体细胞内部生长信息最直接的反映。根据菌丝量可以确定合适的补料量、供氧量及合适的生长环境，从而有利