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宽筋藤多糖的提取纯化 　　摘要：对宽筋藤（Tinospora sinensis）多糖进行提取纯化研究，采用正交试验确定了影响宽筋藤多糖的提取因素主次顺序为提取温度、提取时间、料液比，即在提取温度为90 ℃，提取90 min，料液比1∶10（m/V， g∶mL）的条件下提取，宽筋藤粗多糖提取率为3.94%，其中还原性多糖含量为20.40%，蛋白质含量为8.21%；去除蛋白质的方法中TCA法最适宜宽筋藤粗多糖的纯化，能去除86.83%的蛋白质，还原性多糖保留率为68.67%。 　　关键词：宽筋藤（Tinospora sinensis）；多糖；蛋白质；TCA法 　　中图分类号：R284.2；O657.32文献标识码：A文章编号：0439-8114（2014）10-2389-03 　　Extraction and Purification of Tinospora sinensis Polysaccharide 　　WANG Shu，WEN Hui，YAO Jing，LU Yong-chang 　　（College of Chemistry and Life Sciences，Qinghai University for Nationalities，Xining 810007，China） 　　Abstract： To study the extraction and purification of the polysaccharide from Tinospora sinensis，the extraction temperature， extraction timeand solid-liquid ratio was determined by phenol-sulfuric acid method. The optimal conditions were temperature 90 ℃， extracting 90 min twice with solid-liquid ratio 1∶10. The extraction rate of polysaccharide from Tinospora sinensis was 3.94%. The content of polysaccharide was 20.40%. The content of protein was 8.21%. The removal rate of protein was 86.83% and the retention rate of polysaccharide was 68.67% by TCA method. 　　Key words： Tinospora sinensis； polysaccharides； protein； TCA method 　　基金项目：青海省科技厅国际交流项目（2012-H-811） 　　宽筋藤（Tinospora sinensis）为防己科青牛胆属植物中华青牛胆（Tinospora sinensis）的茎，是藏药中的常用药材。藏药药典《晶珠本草》中记载，其功效为清除隆热症[1，2]。多糖是构成生命的基本物质之一，近年来大量研究表明，植物多糖具有提高机体免疫功能，抗肿瘤，抗病毒，抗凝血，抗衰老等作用[3-10]。目前关于宽筋藤多糖的提取纯化研究鲜见报道，本研究通过正交试验设计探讨了宽筋藤多糖的最佳提取条件，比较了Sevag法、TCA法，TCA-正丁醇法等对宽筋藤粗多糖中蛋白质的去除效果，为宽筋藤多糖的进一步研究和开发利用打好基础。 　　1材料与方法 　　1.1仪器、试剂与材料 　　T6型新锐可见分光光度计（北京普析通用仪器）；KQ-300B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；AL204型电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）；SHBIII型循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司），EYELA-N1100型旋转蒸发仪（上海爱明仪器有限公司），TD3型低速离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）。 　　葡萄糖，牛血清白蛋白，苯酚，硫酸，考马斯亮蓝G，磷酸，无水乙醇，氯化钠，三氯乙酸，正丁醇，氯仿均为分析纯。 　　宽筋藤于2012年9月采自青海省互助北山，经青海民族大学化学与生命科学学院毛继祖教授鉴定为藏药宽筋藤。 　　1.2方法 　　1.2.1比色法测定还原性多糖及蛋白质标准曲线 　　1）标准溶液的配制。精确称取经105 ℃干燥至恒重的葡萄糖0.100 0 g定容至100 mL容量瓶中，得1 mg/mL葡萄糖标准溶液，从中准确移取10 mL定容至100 mL，得0.1 mg/mL葡萄糖标准操作液。 　　精密称取0.100 0 g牛血清白蛋白，用0.15 mol/L Na