高效液相色谱法测定黄连解毒药剂中黄芩苷含量.docVIP

高效液相色谱法测定黄连解毒药剂中黄芩苷含量 　　摘 要：建立反相高效液相色谱法测定黄连解毒药剂中黄芩苷的含量。方法：采用奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm），甲醇-水-磷酸（47∶53：0.2）为流动相，检测波长为280nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃。黄芩苷在20～100μg?mL-1范围内呈良好的线性关系。黄芩苷平均回收率分别为99.3%。结论：本法简便、准确，可用于黄连解毒药剂中黄芩苷的含量测定。 　　关键词：黄芩苷；含量；测定 　　黄连解毒药剂由黄连、黄柏、黄芩、栀子组成。黄连解毒药剂，为清热剂，具有清热解毒之功效。黄连解毒药剂主治三焦火毒证，主要用于治疗败血症、脓毒血症、痢疾、肺炎、泌尿系感染、流行性脑脊髓膜炎、乙型脑炎等属热毒为患者。《医方考》记载“：用黄连泻心火，黄芩泻肺肝之火，黄柏泻肾火，栀子泻上下之火。”黄芩为黄连解毒药剂主要成分。黄芩本名“芩”，是为芩草，因草色黄而有俗名“黄芩”。黄芩具有清热燥湿，凉血安胎，解毒功效，主治温热病、湿热黄胆、肺炎、痢疾、目赤、胎动不安、高血压、痈肿疖疮等症。 　　黄芩具有抗病毒、抗菌、抗氧化、抗过敏、保护神经元等多方面的药理作用，在抗人类免疫缺陷病毒、抗肿瘤等方面具有潜在的开发应用价值[1-5]。黄芩苷具有镇静、降压、清除自由基、抗心律失常、抗肺炎衣原体所致的动脉粥样硬化作用等。本文采用高效液相法对黄连解毒药剂中的黄芩苷的进行了含量测定。 　　1 仪器与试药 　　1.1 仪器：ELGA PURELAB Ultra 实验室超纯水系统（天津市劳尔科技有限公司）；XP204分析天平（北京联博永通科技有限公司）；SPCC-220E-国产全自动实验室洗瓶机（东莞市谱标实验器材科技有限公司）；声彦SCQ-1000B超声波提取仪（上海声彦超声波仪器有限公司）；759S紫外可见分光光度计（上海棱光技术有限公司）；iChrom 5100高效液相色谱仪（大连依利特分析仪器有限公司）。 　　1.2 色谱柱：奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm）。 　　1.3 对照品：黄芩苷。 　　1.4 试剂：甲醇（济南英出化工科技有限公司）、三乙胺（济南英出化工科技有限公司）、辛烷磺酸钠（天津中和盛泰化工有限公司）、草酸溶（天津中和盛泰化工有限公司）、磷酸（广州市新易化工有限公司）、冰醋酸（天津中和盛泰化工有限公司）、乙腈（天津中和盛泰化工有限公司）。 　　1.5 试药：黄连解毒药剂。 　　2 测定方法确定 　　2.1 色谱条件 　　依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。流动相：甲醇-水-磷酸（47∶53：0.2）为流动相，检测波长：280nm，流速：1.0m?min-1。柱温：30℃。理论板数按黄芩苷峰计算应不得低于3000。 　　2.2 对照品溶液的制备 　　取在60℃减压干燥4小时的黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含60μg的溶液，即得。 　　2.3 供试品溶液的制备 　　取本品适量，精密称定，加70%乙醇40ml，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤人同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀。精密量取5ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。 　　2.4 专属性试验 　　依照处方取除黄芩，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照2.3项下供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在黄芩苷出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。 　　2.5 精密度试验 　　精密称取黄芩苷对照品适量，加甲醇使溶解，制成浓度为60μg?mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.53%，表明本方法精密度良好。 　　2.6 对照品的线性考察 　　精密称取适量黄芩苷对照品，加入流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含20、30、40、50、60、70、80、90、100微克的溶液。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，黄芩苷在20～100μg?mL-1范围内呈良好的线性关系。 　　2.7 重现性试验 　　称取同一批的黄芩苷样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.62%，结果表明此方法的重现性良好。 　　2.8 准确度试验 　　取对照品适量，精密称取已知含量的样品9份，置量瓶中，分别精密加入黄芩苷对照品，按项下方法制备成80%、100%、120%。取模拟样品照“含量测定”项下方法试验，计