生技報告-pcr植物dna跑膠及od質.docVIP

生物技術-PCR.電泳分析 實習日期: 2011年 1月 6日 星期四 實習時間:10:00 AM ~ 12:00 PM 實習項目:生物技術 PCR與電泳分析 10:00 AM ~ 12:00 PM 分為2部分 -聚合酵素連鎖反應 Polymerase Chain Reaction PCR -DNA之瓊脂膠電泳分析 Agarose Gel Electrophoresis 1.聚合酵素連鎖反應 Polymerase Chain Reaction PCR ?所需材料 細菌質體DNA 作為DNA模板 Taq DNA聚合酵素 引子 dNTP 10 x PCR緩衝溶液及滅菌純水 ?所需工具 聚合酵素連鎖反應器 0.2 ml薄壁微量離心館 微量吸管器 Micropipette 微量吸管 Tip ?PCR溶液配製 滅菌純水 7.1μl 10 x PCR緩衝溶液 含15 mM 氯化鎂 1.0μl 2.5 mM dNTP 0.8μl 模板DNA溶液 100ng 0.5μl 10μM 引子F 0.2μl 10μM 引子R 0.2μl Taq DNA聚合酵素 2 U/μL 0.2μl 總體積 10μl ?方法 Ⅰ.以滅菌純水適當析是DNA容易和引子備用 Ⅱ.取微量離心管配置PCR溶液,依序加入滅菌純水.10 x PCR緩衝溶液Ⅲ.將混合均勻後反應,管置於離心機短暫離心,使混合液聚積於反應管之底部 Ⅳ.再移入PCR反應器設定條件進行反應 Ⅴ.結束後,取出PCR產物進行膠體電泳分析 2. DNA之瓊脂膠電泳分析 Agarose Gel Electrophoresis ?所需材料 DNA 前項實驗利用PCR大量複製的DNA片段 瓊脂 螢光染劑 DNA Marker 100 bp 1x TAE電泳緩衝溶液 10x DNA 電泳樣品緩衝溶液 Loading Buffer ?所需工具 鑄膠器 尺疏 comb 電泳槽 電源供應器 微量吸管器 微量吸管 ?方法 Ⅰ.在100ml x TAE電泳緩衝溶液中加入2g瓊脂,使之在高溫下完全溶解並加 以攪拌,略微降溫後加入螢光劑並混合均勻到入鑄膠器中,插入尺梳,在使之 繼續降溫至完全凝固,至備成2％Ⅱ.完全凝固後,將尺梳移除,將瓊脂膠體置入電泳槽,加入1x TAE電泳緩衝溶液 置完全淹過膠體1~2 mm Ⅲ.將9μl DNA樣品混合1μl 10x DNA電泳樣品緩衝溶液,加入在膠體上由尺梳 所形成的孔 well Ⅳ.蓋上電泳槽上蓋,連接開啟電源進行電泳;注意電場正負極方向 Ⅴ.於紫外線燈激發下產生螢光,觀察DNA片段並照像紀錄 3.心得感想 那天真是收穫良多… 但是一看到PPT都是原文,我就傻啦…這…這有點難懂得說…… 不過,還好有認真在聽講,不然這下就真的完全不知道這是在做什麼了… 過程有點複雜是真的,不過可以接受.可是內容卻有點小小的無聊,讓我有興趣缺缺,因為太多專業名詞,再加上我都沒學過,更慘的是都只聽了一次,所以要記得名字根本就有困難,更別說是記得它的作用了… 4.照片 天啊~ 我都快變鬥雞眼了… 工具好多的說… 0.0 這個是裝有分生素的低溫保溫瓶… 準備電泳的成品~ 可是呢…卻失敗了… 沒有螢光的成品… T-T 離心機,使用前要平衡喔!! 這是我們的成品正在照紫外線光的時候 孔隙真的很小,手只要一抖,就完了… 這就是P~ C~ R~ !!