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细胞的分离与活力测定 新乡医学院免疫学教研室 实验目的 掌握常用的动物实验技术。 掌握细胞活力测定的方法。 熟悉血细胞计数板的构造及使用方法。 实验动物的选择 一、实验自身的要求 二、动物的种、系及体质健康情况 三、生长发育情况、一定的年龄与体重 四、高度的敏感性或易感性 五、饲养管理方便 常用的实验动物有豚鼠、小白鼠、家兔、大白鼠等 动物的接种途径 名称 部位 剂量（ml） 备注 皮内接种 背部皮肤 0.1 注射部位出现皮丘 皮下接种 腹壁、背部、腹股沟等 0.2—1.0 针头倾斜15度 腹腔接种 下腹部 0.2—2.0 头低位、曲行进针 颅内接种 眼角与耳根连线中点 0.01—0.2 垂直进针，深约3—6mm 接种方法 小白鼠的捉拿方法 动物的处死法（小白鼠的颈椎脱臼法） 细胞活力测定 一、实验原理 通透性 着色 体积 颜色 死细胞 高 易 大 蓝 活细胞 低 难 小 无色 台盼兰拒染色法 活细胞 死细胞 二、实验材料 小白鼠 手术器械，解剖台 血细胞计数板 显微镜 0.2％的台盼蓝染液 三、实验步骤 １）颈椎脱臼法处死小白鼠，迅速取其脾脏。 ２）将脾脏放入适量生理盐水中，除去筋膜。 ３）取绿豆大小的脾脏，用玻片研磨制成１0ml细胞悬液。 ４）取１ml细胞悬液置试管中，加入１滴台盼蓝染液。 ５）静置3分钟，低倍镜观察。 四、实验结果 随机计数100个细胞，并数出其中活细胞数。 细胞活力＝活细胞数／细胞总数 ＊ 100％ 正常值： 60％－80％ 五、注意事项 1.脾脏去净筋膜，弃边缘，取其中间部分。 2.研磨时不可用力过大，时间不宜过长。 3.染色时间不宜过长或过短。 4.血细胞计数板的使用方法。（10倍镜、暗视野） 附：血细胞记数板 血细胞计数板的构造 白细胞计数区： 四个角得大方格 16个中格（4＊4） 无效计数区 红细胞计数区： 中央区 400个小格（4＊4＊5＊5） 计数注意事项： 1）计左不计右，计上不计下，防止重复计数。 2）“S”随机计数。 下周内容： 一、E玫瑰花环示教 二、淋巴细胞转化示教 三、豚鼠致敏 须要携带学生证，领取显微镜。
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