酪氨酸.docVIP

3.2 Folin-酚法测定胰蛋白酶的酶活力及卵类粘蛋白的抑制活力 测胰蛋白酶的酶活原理： 蛋白酶能催化蛋白质的肽键水解，生成游离氨基酸或小肽。如果蛋白酶的活力大则水解的肽键就多，生成的氢基酸也愈多。测定蛋白酶活力可以采用福林—酚试剂与蛋白质水解出来的酪氨酸作用生成蓝色物，在分光光度计上测蓝色物质的OD值，从酪氨酸标准曲线上查出酪氨酸产物的量，再根据酶活力计算公式计算酶活力的大小。 测定粘蛋白抑制活力原理： 由于卵类粘蛋白在碱性条件先能可逆地与胰蛋白酶结合，抑制其活性，抑制比为1摩尔对1摩尔，因此首先测定出一定量的胰蛋白酶活力单位，再以一定量的卵类粘蛋白与胰蛋白酶一起保温一定时间，使卵类粘蛋白充分与胰蛋白酶相互作用，并抑制胰蛋白酶活性，然后测定胰蛋白酶的剩余活力，用胰蛋白酶活力减去胰蛋白酶的剩余活力，就是卵类粘蛋白的抑制活力。 3.2.1酪氨酸标准曲线绘制 表1 酪氨酸标准曲线加样表 管号 1# 2# 3# 4# 5# 6# 标准酪氨酸（ml） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 无离子水（ml） 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 酪氨酸浓度（ug/ml） 0 20 40 60 80 100 0.4M Na2CO3（ml） 5 5 5 5 5 5 Folin乙试剂（ml） 1 1 1 1 1 1 40℃水浴20min后，测定A680nm A680