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亳芍的生物碱提取技术 　　[摘 要]文章分析了亳芍的生物碱提取及含量测定技术。 　　[关键词]亳芍 成份 测定 　　中图分类号：U284.2 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2016）01-0364-01 　　亳芍（Bozhou Peony Paeonia lactiflora），即亳白芍，主产安徽省亳州地区，为安徽道地药材之一，是毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.或其变种毛果芍药Paeonia trichocarpa栽培品的根，夏秋季采挖，去净泥土和支根，沸水浸或略煮至受热均匀，再经晒干等处理即可。亳芍具有抗炎、免疫调节、抗病毒、抗氧化、抗惊厥、护肝等作用，对胃肠道疾病和心血管疾病也有一定的疗效。 　　化学成分研究表明，亳芍主要含有单萜、倍半萜及三萜、单宁、挥发油、黄酮、多酚类、多糖等活性成分，其中，芍药苷（一种单萜类化合物）是亳芍的主要活性成分。本研究对亳芍生物碱进行提取、定性鉴别及含量测定，为后续的亳芍生物碱分离、结构鉴定及药理学研究奠定基础。 　　1 仪器与试药 　　GJ14-DGF3006型电热恒温干燥箱（金坛市荣华仪器制造有限公司），HH-4型数显恒温水浴锅（金坛市国华电器有限公司），LX-02型利祥手提式粉粹机（上海江信科技有限公司），RE-52D型旋转蒸发器（上海浦沪仪器厂），FA-1004型电子天平（上海精科天平厂），TDL-5Z台式多管架自动平衡离心机（湖南星科科学仪器有限公司）。 　　亳芍购于安徽省亳州药材大市场，经安徽中医学院药用植物标本馆黄和平博士鉴定为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.干燥的根。无水乙醇（扬州沪宝化学试剂有限公司），氨水（扬州沪宝化学试剂有限公司），氯仿（西陇化工股份有限公司），二氯甲烷（西陇化工股份有限公司），甲醇（河北四友卓越科技有限公司），冰醋酸（国药集团化学试剂有限公司），甲醛（无锡市展望化工试剂有限公司），浓硫酸（汕头市西陇化工厂有限公司），次硝酸铋、碘化钾（蚌埠化学试剂厂），浓盐酸（汕头市西陇化工厂有限公司），茚三酮，甲基红，溴甲酚绿，硫酸，氢氧化钠等。 　　2 方法与结果 　　2.1 亳芍总生物碱的提取 　　称取103 ℃烘干至恒重的亳芍粉末25 g，以95%乙醇、料液比1∶4（g/mL）、85 ℃水浴冷凝回流提取3次，每次4 h，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至提取液无醇味，加水适当稀释、定容，缓缓加入浓盐酸，使溶液中浓盐酸含量达5%（V/V），摇匀，4000 r/min离心5 min，弃去沉淀，上清液加等体积二氯甲烷萃取3次除杂，分液漏斗移去二氯甲烷层。向下层水相中缓慢滴加氨水至溶液显碱性（10.0≥pH≥8.5，精密pH试纸测定），摇匀，加入等体积氯仿萃取3次，合并氯仿相，减压回收氯仿，得亳芍总生物碱提取物，加氯仿定容100 mL，平均分成2份，分别用于薄层检测和含量测定。 　　2.2 亳芍生物碱的鉴定 　　2.2.1 显色剂的配制 ①碘化铋钾显色剂：A.碱式硝酸铋0.85 g溶于10 mL冰醋酸，加水40 mL；B.0.8 g碘化钾溶于20 mL水。试液A与B等量混合，置于棕色瓶内保存，作为储备液。用前将1 mL储备液、2 mL冰醋酸与10 mL水混合均匀即可。②甲醛浓硫酸显色剂：30%甲醛溶液0.2 mL与10 mL浓硫酸均匀混合。③茚三酮显色剂：1.5 g茚三酮+100 mL正丁醇+3.0 mL醋酸，溶解、混匀。 　　2.2.2 薄层色谱鉴定 按2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB薄层色谱法（TLC）试验，3.0 mm点样毛细管吸取“2.1”项下亳芍总生物碱提取物，分别点于5块以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G254薄层板上，以乙酸乙酯-氯仿-甲醇-氨水（8∶2∶3∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，分别以碘化铋钾溶液、浓硫酸、甲醛浓硫酸、浓硝酸、茚三酮溶液显色，检视。 　　用甲醛浓硫酸显色检测到4个明显的紫黑色显色斑，说明被测样品中含有生物碱；以浓硫酸显色，亳芍总生物碱提取物中可检测到2个明显的紫色显色斑，提示亳芍生物碱包含乌头碱类化合物；浓硝酸显色，未见明显的显色斑，则说明不含秋水仙碱；茚三酮显色未见明显的显色斑，说明被检测到样品中不含氨基酸或短肽类含氮物质。上述结果表明，亳芍中含有生物碱，其中可能包含乌头碱类生物碱。 　　2.3 亳芍生物碱含量测定 　　主要参照杨氏[12]方法改进而来。总生物碱含量=C×（V空白-VNaOH）×M÷W×100%。式中，C为滴定用NaOH浓度（本试验中为0.02 mol/L）；VNaOH为滴定加入过量硫酸的生物碱所用NaOH体积；V空白为滴定相同浓度相同体积硫酸所用NaOH体积；M为生物碱的相对生物分子