酶学基础(四)课稿.pptVIP

非竞争性抑制的动力学方程: 1v = Km Vmax (1+ ) + [I]Ki 1 [S] 1 Vmax （1+ ） [I]Ki 非竞争性抑制的特征曲线： 1v 正常 ? [I] 1 [S] -1 Km 1 Vmax (1+ ) [I]Ki 3 反竞争性抑制 （uncompetitive inhibition） 概念 抑制剂仅与酶和底物的中间复合物结合而抑制酶活性。 反竞争性抑制作用过程： E E E + P E I I S S S 反竞争性抑制的动力学方程: v= Vmax[S] Km +(1+[I]/Ki) [S] 1v = Km Vmax (1+ ) [I]Ki 1 [S] 1 Vmax 反竞争性抑制的特征曲线： ? [ I ] 正常 1v 1 [S] 1 Vmax -1 Km [I] Ki + (1+ ) -1 Km 1 Vmax (1+ ) [I] Ki 1.2.7激活剂对酶促反应的影响 无机离子激活剂：Cl－等，金属离子（Na＋）等 例如：唾液淀粉酶的激活剂Cl －； 作用：在酶和底物之间起桥梁作用。 一些小分子的有机物：抗坏血酸，半胱氨酸，谷胱苷肽等。 生物大分子激活剂：如蛋白激酶。 酶学基础（四） 1.2 酶反应动力学 酶动力学是研究酶促反应的速度问题，即研究各种因素对酶促反应速度的影响。酶动力学理论与实验在生物化学领域，特别在酶学研究中，有十分重要的作用。 v t 1.2.1酶催化反应速率 通常为底物浓度不超过5％时的产物生成速率。 在低底物浓度时, 反应速度与底物浓度成正比，表现为一级反应特征。 当底物浓度达到一定值，几乎所有的酶都与底物结合后，反应速度达到最大值（Vmax），此时再增加底物浓度，反应速度不再增加，表现为零级反应。 1.2.2 底物浓度对酶促反应速度的影响 1 单底物酶促反应动力学 （1）米氏方程 v = vmax[S] / (Km+[S]) 米氏方程的推导 A快速平衡学说 方程推导三点假设： ①在初速度范围内，产物生成量极少， ES ----E+P这一个反应可以忽略。 ②与底物浓度S相比，酶的浓度E是很小的，因而可忽略由于生成中间复合物[ES]而消耗的底物浓度，底物浓度以起始的浓度开始算起 ③中间复合物ES分解为E+S的速度远远大于ES分解为E+P的速度，在初速度范围内，E+S＝ES的正逆反应速度达到平衡，ES复合物的分解为产物P的速率不足以破坏这一平衡 B 稳态平衡状态 推导假设进行修正： 在稳态平衡条件下，ES复合物分解为产物的速度不能忽略，即ES保持动态平衡是，ES生成速率等于ES分解速率。 单分子酶促反应的米氏方程及Km 推导原则：从酶被底物饱和的现象出发，按照 “稳态平衡”假说的设想进行推导。 米氏方程: 米氏常数: 米氏方程解释： 当[S]??Km时，v=(Vmax/Km) [S], 即v 正比于[S] 当[S]??Km时，v ?Vmax, 即[S]?而v不变 [S] v Km Vm 2 v =（Vm/Km） [S] v=Vm=K2[E] 底物浓度对酶促反应速度的影响 V= Vmax [S] Km + [S] 矩形双曲线： Km的意义 Km：在数值上，酶促反应速度为最大速度一半时的底物浓度。 Km是酶的特征常数之一 判断酶的最适底物 帮助判断某一代谢的方向及生理功能 Km与Ks关系，可表示酶与底物的亲和力 可以用来计算酶活性中心被底物饱和分数。 通过抑制剂对酶的Km及Vmax的影响，区别抑制剂的类型。 Km值与 Vmax值的测定 双倒数作图法又称林-贝氏作图法（1934） 1 = Km 1 + 1 V Vmax [S] Vmax 1/V -1/Km 0 1/[S] 斜率= Km/ Vmax 1/Vmax 2 双底物酶促反应动力学 （1）顺序机制：特征，酶与底物的结合和产物的释放按照一定次序进行 A 有序顺序机制 E A E B P Q EA EAB EPQ EQ B 随机顺序机制 E A B EA B A EB EAB EPQ E P Q Q P EQ EP (2)乒乓机制 底物与酶的结合和产物的释放是交替进行。 E A P B Q E EA EP E EB EQ 1.2.3酶浓度对酶促反应的影响 在一个酶作用的最适条件下，如果底物浓度足够