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斑马鱼中snrpc基因的发育时序表达分析 　　摘 要：为了深入研究鱼类snrpc基因的作用机制，通过分析斑马鱼snrpc的发育时序表达，来探讨snrpc基因在斑马鱼中的功能机理。从斑马鱼的胚胎中提取RNA，进行反转录、PCR、克隆等，得到snrpc基因在胚胎发育不同时期的表达水平。结果表明，在斑马鱼胚胎发育初期，snrpc表达量较高，随着胚胎的不断发育，snrpc的mRNA表达量有所下降，到后期表达量又上升。因此，snrpc表达量的变化可能预示着snrpc发挥功能的关键时期，对snrpc的克隆和表达分析，为后续进一步研究其相关功能奠定了基础。 　　关键词：斑马鱼；时序表达；snrpc 　　中图分类号 S965.299 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2016）08-14-02 　　Abstract：In order to further study the mechanism of snrpc in fish，we analysed the temporal expression of snrpc to explore the potential function of snrpc gene in zebrafish.In this study，the total RNA was extracted from zebrafish embryos，then cDNA was synthesized by reverse transcription. The snrpc gene was amplified successfully by PCR. The temporal expression pattems of ssnrpc among embryonic development were analyzed by RT-PCR. Results showed that the snrpc mRNA were mainly transcribed in the initial development of zebrafish embryos. With the embryonic development，the snrpc mRNA decreased.In the late stages of embryonic development，the mRNA rise again. Therefore，the changes may indicate that high mRNA level stages are the key periods. The cloning and expression characterization of snrpc laid the foundation for the further study of gene function. 　　Key words：Zebrafish；Temporal expression；Snrpc 　　snRNP蛋白在mRNA前体剪切中发挥着重要的功能[1-2]。本实验室在斑马鱼卵巢文库中扩增到一种snrpc基因。研究证明在两栖类的卵细胞中发现有SNRPC蛋白，但在鱼类中，仅在鲫鱼中有报道，但未作深入研究[3-5]，在鱼类中SNRPC蛋白如何发挥功能仍是未知数。在本研究中，通过分析斑马鱼snrpc的发育时序表达，来探讨其在斑马鱼发育过程中的功能机理，以期填补这方面研究的空白。 　　1 材料和方法 　　1.1 实验材料 　　1.1.1 斑马鱼的胚胎培养 斑马鱼（Danio rerio）置于（28±1）℃的水循环系统中进行养殖。 　　1.1.2 主要仪器设备 Sequi-Gen电泳仪系统，Bio-RabGONGSI公司；PCR仪，Bio-RabGONGSI公司；定量移液器，法国Glison公司；Bio-RabGONG-SI公司，凝胶成像系统，高速冷冻离心机；隔水式恒温培养箱，上海精宏实验公司；超净工作台；低温水浴锅；恒温水浴锅；恒温摇床，上海精宏实验公司。 　　1.1.3 主要试剂 PCR taq酶，TaKaRa公司；限制性内切酶，NEB公司；PCR纯化试剂盒、质粒提取试剂盒、酶切胶回收试剂盒，上海生工；T4连接酶购，Promega；KOD kit，TOYOBO。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 斑马鱼snrpc的克隆 （1）RNA的提取；（2）mRNA逆转录成cDNA；（3）PCR扩增目的基因snrpc。 　　将PCR的产物用琼脂糖凝胶电泳进行检测，将与预期一致的条带回收，连接、转化及阳性克隆鉴定。 　　1.2.2 mRNA表达水平检测 　　1.2.2.1 各个时期胚胎RNA的提取和cDNA的合成 和前面总