【与名师对话】2014届高考生物一轮复习 第3讲 DNA和蛋白质技术课件 新人教版选修1.ppt

【解析】　血红蛋白的提取与分离过程中，在使红细胞破裂释放出血红蛋白后，先进行透析去除小分子杂质，然后再利用凝胶色谱法利用分子大小的差异对血红蛋白分子进行分离。 【答案】　(1)运输　防止血液凝固　(2)磷酸缓冲液　洗脱血红蛋白　(3)透析(粗分离)　去除样品中分子量较小的杂质　凝胶色谱法　相对分子质量的大小　④①②③　(4)纯度鉴定 1. 红细胞洗涤过程中，洗涤三次后，上清液仍有黄色，可增加洗涤次数，否则无法除去血浆蛋白；离心时转速要低，时间要短，否则白细胞等会一同沉淀，达不到分离效果。 2. 血红蛋白释放过程中，蒸馏水的作用是涨破红细胞，甲苯的作用主要是溶解细胞膜。 3. 为了加快干凝胶的膨胀，可将加入洗脱液的湿凝胶用沸水浴加热，逐渐升温至接近沸腾，通常只需1～2 h。这种方法不但节约时间，而且可以除去凝胶中可能带有的微生物，排除胶粒内的空气。 4．滴加样品时，吸管管口要贴着管壁环绕移动，防止破坏凝胶面。 1．分离血红蛋白时，将搅拌好的混合液转移到离心管中，以2000 r/min的速度离心10 min后，可以明显看到试管中的溶液分为4层。下列描述中，正确的是 (　　) A．第1层为无色透明的甲苯层 B．第2层为红色透明层，含血红蛋白 C．第4层为白色薄层固体，是脂溶性沉淀物 D．第3层为暗红色沉淀物，含破裂的细胞 【解析】　采集的血样先经处理分离出红细胞，然后在蒸馏水和甲苯的作用下，使红细胞破裂释放出血红蛋白。分离血红蛋白时，将搅拌好的混合液转移到离心管中，以2000 r/min速度离心10 min后，可以明显看到试管中的溶液分为4层：第1层为无色透明的甲苯层；第2层为白色薄层固体，是脂溶性物质的沉淀层；第3层是红色透明液体，是血红蛋白的水溶液；第4层是杂质的暗红色沉淀物。将试管中的液体用滤纸过滤，除去脂溶性杂质沉淀层，于分液漏斗静置片刻后，分出下层的红色透明液体即血红蛋白水溶液。 【答案】　A 2．(2011·广东卷)以下关于猪血红蛋白提纯的描述，不正确的是 (　　) A．洗涤红细胞时，使用生理盐水可防止红细胞破裂 B．猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少 C．血红蛋白的颜色可用于凝胶色谱法分离过程的监测 D．在凝胶色谱法分离过程中，血红蛋白比分子量较小的杂蛋白移动慢 【解析】　D项考查凝胶色谱法分离蛋白质的原理，相对分子质量越大的通过凝胶色谱柱的速度越快，故D错误。A正确，洗涤的目的是去除杂蛋白以利于后续步骤的分离纯化，加入的是生理盐水，缓慢搅拌10 min，低速短时间离心，重复洗涤三次，直至上清液不再呈现黄色，表明红细胞已洗涤干净。B正确，哺乳动物成熟的红细胞没有细胞核与众多的细胞器，提纯时杂蛋白较少。C正确，血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱法分离过程中可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液(如果操作都正确，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出)，这使得血红蛋白的分离过程非常直观，简化了操作。 【答案】　D 3．蛋白质的肽链之间可通过二硫键维持稳定。已知不同的多肽产物可因相对分子质量不同而以电泳方式分离。下列左图是一个分析蛋白质的电泳结果图，“－”代表没加还原剂，“＋”代表加有还原剂，还原剂可打断二硫键，“M”代表某些已知相对分子质量的蛋白质或多肽，M右侧的数字代表这些蛋白质或多肽的相对分子质量。右图中的“－”代表二硫键。根据左侧结果，下图中最能代表该蛋白质结构的是 (　　) 【解析】　本题考查蛋白质结构的有关知识，中等难度。根据电泳结果图和题意分析，左图是一个分析细菌蛋白的电泳结果图，由于“－”代表没加还原剂，可见所分析的细菌蛋白为一条相对分子质量约为130的多肽，加还原剂打断二硫键后，由左图“＋”可知，所分析细菌蛋白的这条多肽已被分解为相对分子质量约为30与50的多肽，由于多肽链总相对分子质量约为130，可推知经二硫键打断后的多肽应是2条相对分子质量为50的多肽，l条相对分子质量为30的多肽，即选C。 【答案】　C “血红蛋白的提取和分离实验”中的注意事项 1．红细胞的洗涤：洗涤次数不能过少，否则无法除去血浆蛋白；要低速、短时离心，否则会使白细胞等一同沉淀，达不到分离的效果。 2．凝胶的预处理：用沸水浴法不但节约时间，而且能除去凝胶中可能带有的微生物，排除胶粒内的气泡。 3．色谱柱的装填：装填时尽量紧密，减小颗粒间隙；无气泡；洗脱液不能断流。 4．色谱柱成功的标志：红色区带均匀一致地移动。 (3)装填凝胶色谱柱时，要注意色谱柱内不能有气泡存在，一旦发现有气泡，凝胶色谱柱必须重新装填。这是因为________________________________________________。 【解析】　柠檬酸钠是一种抗凝剂，能够防止血液凝固。凝胶色谱柱