第五章基因表达的调节regulation.ppt

4.λ溶原的建立和维持 （1）λ的溶原化是由cII基因产物cII蛋白支配的，cII激活子刺激从PRE，Pint的转录。从PRE的转录产生cI蛋白（λ阻遏子），cI蛋白阻遏从PL和PR的转录但是它又是从PRM（维持启动子）的自动调节因子，使λ整合入寄主染色体，并维持溶原状态； （2）溶原或溶菌（烈性感染）途径的采取部份决定于寄主的营养状态，cII蛋白易 受寄主细胞蛋白酶的破坏，当细胞营养充足是，蛋白酶活性高，而使λ进入溶菌周期。 溶原状态的建立和维持（见图） 5.λ反阻遏子Cro和从溶菌状态的诱导 （1）整合状态的λ噬菌体称原噬菌体（prophase）； （2）当寄主受到DNA损伤试剂或紫外光等物理因子处理时诱发SOS反应，recA蛋白的蛋白酶活性激活，于是cI蛋白被水解， PL，PR的阻碍解除，Cro基因被转录，Cro反阻遏子合成； （3）Cro蛋白对O的亲和力与cI相反，是OR3 OR2 OR1，因而它先结合在OR3，阻遏cI基因的转录和翻译，PR，PL的转录开始，并逐步产生溶菌周期的蛋白，使λ从寄主DNA上切出，进入溶菌状态。 6. cI蛋白与Cro蛋白的拮抗作用 λ阻遏子和Cro蛋白的六个结合位点一条链的碱基顺序 λ操纵基因并列三个阻遏子结合位点 每个操纵基因结合位置有17bp，有轴对称性，六个结合位点都相似，但有一定的差异； cI阻遏子对操纵基因的亲和力 OL1 OL2 OL3 Cro反阻遏子相反 OR1 OR2 OR3 阻遏子在操纵基因上的结合 阻遏子亚基27,000 daltons,分N末端区（92个氨基酸残基），C末端（132-236），40个残基的连接肽键。 原核生物核糖体蛋白合成的自我调节及与rRNA合成的协调（autogenous contol） a. 核糖体蛋白（r-protein）与其他细胞中的蛋白质合成因子，RNA聚合酶亚基基因混合组成多个操纵子，以协调合成的速度； b. 自我调节发生在翻译水平，每个操纵子中编码着一种“关键”蛋白（key-protein），这种蛋白浓度增加时会结合于mRNA的翻译起始位置，造成“翻译阻遏”（translation repressor） 协调细胞内氨基酸浓度的“应急反应”（stringent response） GDP＋ATP 酶 ppGpp＋AMP 导致rRNA合成的急剧减少； c. r-protein的合成受rRNA水平的调节 十. 基因表达的重组调节 生活在人小肠中的沙门氏杆菌（Sa lmonella）会周期性地改变鞭毛蛋白（phase variation，约1000细胞世代一次），鞭毛蛋白地周期性改变以逃避寄主免疫系统的攻击。 十一. 真核基因表达的调节 特点： a. 转录的激活与染色质结构的多种改变相关； chromatin remodeling b. 主要的调控是正调节； c. 转录和翻译在空间上是分离的（有核与核膜存在）；d,调节蛋白结构更复杂。 一. 转录活性染色质具有特殊性质 1. 转录活化区域对核酸酶是高度敏感的，通常染色质被DNase降解,DNA片断长约为n200bp，转录活性区上游被 降解位点更不规则，产生不规则片断；这些位点称为高敏感区。 2. 脱甲基化 胞嘧啶甲基化一般发生在CpG顺序，有转录活性的染色质DNA常被脱甲基化； 3. 转录活跃染色质缺少组蛋白和相关蛋白，核小体核心蛋白常被乙酰化或与泛素（ubiquitin）相结合； 以上事实证明转录必需解除染色质结构中的障碍。 二. 大多数的真核启动子是正调控的 1. 真核RNA多聚酶II对基因的转录依赖激活蛋白（activators），RNA polymerase II对启动子顺序很少或没有特殊亲和力，负调节因子不普遍； 2. 真核生物采取正调节的两种原因 a. 真核生物基因组庞大，随着DNA量增加，负调控因子和DNA特殊顺序结合的特异性降低。转录起始使用多种正调节蛋白可以提高特异性。各种正调节因子 必须结合于不同的DNA顺序，然后形成转录复合物，转录辅因子的选择性组合具有多样性，转录的特异性就可被改善。 多细胞有机体一个基因的调节位点平均在五个以上； b. 在大基因组中使用正调节更有效，经济。 人（约4万个基因），通常大部分基因处于灭活状态，细胞只要选择性地合成一组激活蛋白，便可以使一组细胞所需的基因被转录； c. 增强子（enhancer）：真核细胞中普遍存在的正调控元件，激活转录特点： I. 可以在长距离内起作用，与被调节基因的相对位置无关，如SV40增强子，2个72bp的串联重复顺序，能在5.2kb长的整个基因组的任何一个位置起作用； II. 一种增强子只能在特定类型的