第十章高效液相色谱法第三节高效液相色谱固定相与流动相分解.pptVIP

第十章高效液相色谱法 一、高效液相色谱固定相 二、高效液相色谱流动相 一、高效液相色谱固定相 1、分配色谱（液－液色谱）固定相 ⑴ 全多孔型固定相（大孔填料，既有大孔，也有小孔） 由氧化硅、氧化铝、硅藻土等制成的多孔球体；早期 采用100μm的大颗粒，表面涂渍固定液； ⑵ 表面多孔型固定相（薄壳型微珠固定相） 30-40μm的玻璃微球，表面附着一层厚度为1-2μm的 多孔性活性物质（硅胶、氧化铝、分子筛）后，涂渍固定液。 粒度均匀，重现性好；但柱容量低，对检测器要求高； 化学键合固定相的特点： 2、吸附色谱（液－固色谱）固定相 主要有：硅胶、氧化铝、分子筛、聚酰胺， 全多孔型和薄壳型，粒度小于10 μm。 3、离子交换（离子交换色谱）固定相 ⑴薄壳型离子交换树脂固定相 薄壳玻璃珠为担体，表面涂离子交换树脂。 ⑵离子交换键合固定相 离子交换树脂键合在硅胶表面，形成固定相。 阳离子交换树脂和阴离子交换树脂。 4、空间排阻（凝胶渗透）色谱 一般分为三类： ⑴软质凝胶 葡聚糖凝胶、琼脂凝胶等多孔网状结构的物质，可溶涨 至本身体积的许多倍。一般是水为流动相，主要用于常压分 离，不适合于高压分离。 ⑵半硬质凝胶 主要由聚苯乙烯和二乙烯基苯交联而成，也称之为有机 凝胶；溶涨性小于软质凝胶。 ⑶硬质凝胶 多孔硅胶和玻珠等，孔径恒定，粒度分布较窄。具有化 学稳定性好，热稳定性好，机械强度大，不易粉碎，流动相 性质影响小等优点。是目前常用的凝胶渗透色谱固定相。 5、手性固定相 主要用于分离手性异构体。 手性异构体的分离已成为液相色谱的重要内容之一。 用得较多的手性固定相主要有环糊精和手性冠醚。 二、高效液相色谱流动相 1、流动相特性 （1）液相色谱的流动相又称为：淋洗液/洗脱剂/洗脱液。流动相组成改变，极性改变，可显著改变组分分离状况； （2）亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定相的极性，称为正相液液色谱法，极性柱也称正相柱。 （3）若流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液液色谱，非极性柱也称为反相柱。组分在两种类型分离柱上的出峰顺序相反。 2、流动相类别 3、流动相选择 4、选择流动相时应注意的几个问题 * * 第三节 高效液相色谱固定相与流动相 ⑶ 化学键合固定相 以二氧化硅为基质，由于二氧化硅表面富含硅羟基，通过化学反应可键合各种功能团，即化学键合固定相; 目前应用最广、性能最佳的固定相。 上述两类固定相现多采用10μm以下小颗粒，孔洞浅，传质速率快，柱效高，分离效果好。化学键合制备柱填料，目前应用较广泛； 主要类型有: a. 硅氧碳键型： ≡Si—O—C b. 硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C c. 硅碳键型： ≡Si—C d. 硅氮键型： ≡Si—N 其中，由于硅氧硅碳键稳定，耐水，耐光，耐有机溶剂，其形成的的键合固定相应用最广。 （1）传 质 快：表面无深凹陷，比一般液体固定相传质快； 传质阻力非常小。 （2）寿 命 长：化学键合，无固定液流失，耐流动相冲击； 耐水、耐光、耐有机溶剂，稳定； （4）选择性好：可键合不同官能团，提高选择性； （5）可梯度洗脱： 存在着双重分离机制： (键合基团的覆盖率决定分离机理) 高覆盖率：分配为主； 低覆盖率：吸附为主； 按流动相组成分：单组分和多组分； 按极性分：极性、弱极性、非极性； 按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。 常用溶剂： 己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、水。 采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。 在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。 如采用正相液-液分配分