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细胞工程 任课老师：金裕华 Email：evaking2009@126.com 教材及参考书 一、教材 杨淑慎.细胞工程.科学出版社，2009. 二、参考书目 （1）周维燕. 植物细胞工程原理与技术. 中国农业大学出版社， 2001. （2）谢从华，柳俊．植物细胞工程．高等教育出版社，2004. （3） 第1章 绪论 1.1 细胞工程的定义和基本内容 细胞工程是应用细胞生物学和分子生物的方法，通过类似于工程学的步骤，在细胞整体水平或细胞器水平上，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质以获得新型生物或特种细胞产品的一门综合性科学技术。 核心技术：细胞、组织培养与繁殖,细胞融合等 目的：获得新性状、新个体、新物质 学科交叉： 研究范围： 根据研究水平： 根据研究对象： 1.2 细胞工程的基本技术和内容 器官、组织和细胞培养 原生质体培养 染色体工程 动物胚胎工程 胚胎干细胞 植物胚胎培养 转基因生物与生物反应器 1. 器官、组织和细胞培养 是指对生物体的器官、组织或细胞进行离体培养，研究所需培养系统和条件，研究器官、组织和细胞的形态发生规律，或使之形成组织或有机体的技术。 2.原生质体培养 原生质体培养是将植物细胞去壁使之游离成原生质体，有利于细胞操作，比如，原生质体融合，在适宜条件下使其细胞壁再生，进行细胞分裂分化，形成完整个体的技术。 3. 染色体工程 染色体工程是指借助物理化学等方法，使生物染色体数目、结构和功能发生改变的技术。 1.3 细胞工程发展史 1.3.1 植物细胞工程的发展 1、探索阶段 Schleiden and Schwann 提出了细胞学说（主要内容） Haberlandt认为植物任何细胞都具有发育成为完整个体的潜在能力，从而提出植物细胞全能性。 植物细胞工程三个研究方向的发展： （1）植物组织培养的发展 （2）植物细胞融合研究 （3）单倍体植株培养研究 （1）植物组织培养的发展 1934年荷兰植物学家温特（F. W. Went）发现生长素（吲哚乙酸），并证实了其在植物细胞培养中的作用。 1937年法国科学家高特里特（R. J. Gantheret）和诺比考特（Nobercourt）几乎同时离体培养了胡萝卜组织，并使细胞增殖。 1948年斯库格（Skoog）等较好解决了从离体组织或器官中诱导植物再生的问题，确定腺嘌呤/生长素的比例为调控芽和根形成的一个重要条件。 1953年，缪尔（Muir）由无菌冠瘿组织的悬浮培养物及易碎的愈伤组织中分离得到单个细胞，并通过看守培养使细胞分裂生长，开创了单细胞无性繁殖的工作。 1958年施图尔德（Steward）等从胡萝卜根韧皮部愈伤组织获得单细胞，并且经诱导形成胚状体再生了植株，成为世界首次通过实验证实了植物细胞具有全能性的科学家。 （2）植物细胞融合研究 1960年英国诺丁汉大学科金教授创造性应用酶解方法首次成功从番茄幼苗根部制备到大量的原生质体。 1972年美国的卡尔森等人用NaNO3作为融合诱导剂将来自不同种的两个烟草原生质体进行融合，获得了世界上第一个细胞杂种植株。 （3）单倍体植株培养研究 1974年格雷沙夫（Greshoff）从葡萄花药培养中得到单倍体愈伤组织。 1975年罗萨蒂（Rosati）从草莓花药培养中获得小孢子发育的单倍体植株。 （3）单倍体植株培养研究 1921年，伯格纳在曼陀罗中发现了单倍体植株。 60年代，许多人工诱导单倍体植株的方法问世，大大地缩短了杂交育种的时间。 从1970年开始中国应用单倍体育种方法，已成功地培育出小麦、小黑麦、小冰麦、玉米、辣椒、油菜等花粉植株 。 曼陀罗花药培养获得单倍体植株 1.3.2 动物细胞工程发展简史 动物细胞培养方法的建立 细胞融合（自然现象——人工融合） 动物胚胎移植 体处受精 动物克隆 转基因动物 胚胎干细胞 动物细胞工程的发展 三项关键技术的发展: （1）动物细胞融合、 （2）动物细胞组织培养、 （3）动物克隆 （1）细胞融合现象的发现和发展 1838年马勒（Muller）在脊椎动物肿瘤细胞中观察到了多核现象。在此间前后，施旺（Schwann）在天花、水痘等病理组织中观察到了多核现象； 1849年罗宾（Lobing）在骨髓中也发现了多核现象的存在； 1855-1858年科学家在肺组织等多种正常组织和坏死部位都发现了多核现象。 1859年巴里（A. Barli）在研究黏虫生活时发现，某些黏虫存在着由单个细胞融合形成多核原生质团的情况。 另外，1965年哈里斯和沃特金斯证明了某些灭活的病毒在一定条件下可用来诱导动物细胞融合。 这些发现为细胞融合研究提供了初步的研究线索、依据和方法。 当前细胞融合技术已日渐成熟。例，单克隆抗体。 1975年，英国剑桥大学分子生物学研究室的科莱尔（Kohler）和米