家兔急性肾功能全及其肾功能评价指标检测.docVIP

家兔急性肾功能不全及其肾功能评价指标检测 姓名 温正煌 学号座机电话号码0904011专业 临床医学 班级 本部4班 实验目的 1.用氯化汞中毒方法复制家兔急性肾功能不全模型。 2.观察急性肾功能不全时肾功能评价指标变化，从而探讨致病因素及急性肾功能不全的可能发病机制。 实验材料和方法 实验仪器：分光光度计，离心机，恒温水浴锅，哺乳动物手术器械，注射器，试管架，试管， 试管夹，微量移液器，量筒 实验药品和试剂：20%氨基甲酰乙酯，0.6%酚红溶液，20%葡萄糖溶液，10%NaOH，12.5%NaOH 溶液，50%乙酸溶液，1%氯化汞，碱性你苦味酸，生理盐水，肌酐标准应用液，蒸馏水 实验动物 家兔 实验步骤 1.1急性肾功能不全模型复制：于实验前24h，取两只家兔，称重，一只作为实验兔，按 0.8~1.0ml/kg体重剂量皮下或肌肉注射10g/L氯化汞造成急性肾功能不全备用，另一只皮下注射或肌肉注射等量的生理盐水作为对照兔。 1.2麻醉固定：用200g/L氨基甲酸乙酯按5ml/kg体重剂量注射耳缘静脉，缓慢注射。待兔 麻醉后将其仰卧，先后固定四肢及兔头。 1.3心脏采血：剪去家兔胸前区部位的毛，在第3~4肋间靠近胸骨处，用左手食指摸到心跳最明显处，右手持注射器垂直刺入心脏，当针穿刺心脏时，血液由于心脏搏动的力量自动进入注射器，取血3ml，推入干燥试管，静置。 1.4 膀胱插管术：从耻骨联合向上沿中线作约3~4厘米的切口，沿腹白线打开腹腔，将膀胱轻拉至腹壁外，先辨认清膀胱和输尿管的解剖部位，先用注射器取尿液2ml于试管中，然后在输尿管下方穿线结扎尿道，再用止血钳提起膀胱前壁（靠近顶端部分），选择血管较少处，切一纵行小口，插入插管后结扎，将膀胱插管平放于耻骨处，引流管自然下垂，管口低于膀胱水平，排空膀胱，术毕，用温热生理盐水纱布覆盖腹部切口。然后准备小烧杯，收集尿液。 1.5酚红排泄试验：按1ml/kg耳缘静脉注射0.6%酚红溶液,开始计时，再按30ml/kg耳缘静脉缓慢注射20%葡萄糖溶液。从注射酚红溶液起收集15分钟（对照组），30分钟（模型组）尿液。 1.6生化检测 1.6.1测酚红排泄率 a.收集注射酚红后的全部尿液移入500ml量筒内，加入10%NaOH10ml，使之显色，再加入自来水至500ml摇匀。 b.从量筒中吸出尿液置于试管中，与标准管比色管进行比较，即为15min、30min酚红排泄率。 1.6.2测血肌酐 将静置后心脏采血的血用离心机2000r/min离心5分钟，小心吸取血清置于另一干燥试管中，测血肌酐用。取硬质试管3支编号，分别为空白管、标准管及测定管。按表1加样，混匀，37℃水浴30min，用分光光度计以波长510nm，空白调零，读OD值。然后各管液体倒回试管，加50%乙酸溶液两滴，静置6min后，再测OD’值。按公式Cr（mg%） （OD测-OD’测）/（OD标-OD’标）×0.01/0.2×100（正常值 0.7~0.8mg%） 表1 血清肌酐测定 单位/ml 空白管 标准管 测定管 肌酐标准应用液/（0.05mg/ml 0.2 血清 0.2 蒸馏水 0.2 碱性苦味酸 2.0 2.0 2.0 1.6.3测尿肌酐 a.按表2中步骤操作 b.混匀，放10min后加蒸馏水6.0ml，摇匀，用分光光度计以波长530nm，空白调零，读 取OD值，按公式计算尿肌酐值[Cr]p mg% OD测/OD标×0.05mg×100ml/0.1ml 表2 尿肌酐测定 单位/ml 空白管 标准管 测定管 尿液（原尿或1:50稀释）×尿量（ml/min 1.7肾形态学观察：于耳缘静脉注射10ml空气处死家兔，解剖取出肾脏，沉重，计算肾脏与 体重之比（即肾系数），并观察肾外形、质地，包膜，最大径纵向剖开肾脏，观察肾切面包膜、肾实质色泽、皮髓质结构改变。 实验结果： 家兔的血肌酐、尿肌酐数据表 管号 对照组 模型组 血肌酐 尿肌酐 血肌酐 尿肌酐 加乙酸前 加乙酸后 加乙酸前 加乙酸后 标准管 0.423 0.052 0.461 0.051 0.016 0.181 测定管 0.056 0.049 0.157 0.150 0.040 0.086 对照组和模型组家兔各项生化指标 　 血清肌酐[Cr]p（mg%） 尿肌酐[Cr]u（mg%） 尿肌酐/血肌酐 酚红排泄率（%） 肾比重（g/kg 内生肌酐清除率 对照组 9.4 7.85 0.83 45 8.79 0.0835 模型组 15.7 4.3 0.27 5 7.33 0.0054 不同浓度标准比色液分光光度值 排泄率（%） 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 OD值