补肾强身片微生物验证.docVIP

补肾强身片微生物限度方法验证资料 检 品 编 号 规 格 0．3g 检 品 名 称 补肾强身片 批 号 验 证 依 据 《中国药典2010年版一部》附录微生物限度检法 生 产 厂 家 验 证 条 件 仪 器 设 备 隔水式培养箱 真菌培养箱 隔水式培养箱 环 境 条 件 环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域。 培 养 基 营养琼脂培养基 批号 改良马丁培养基 批号 营养肉汤培养基 批号 玫瑰红钠琼脂培养基 批号 胆盐乳糖增菌液 BL 批号 改良马丁琼脂培养基 批号 乳糖胆盐发酵培养基 批号 均由北京三药科技开发公司生产 试 验 用 菌 种 枯草芽孢杆菌[CMCC B 63501] 金黄色葡萄球菌[CMCC B 26003] 大肠埃希菌 [CMCC B 44102] 白色念珠菌 [CMCC F 98001] 黑 曲 霉 [CMCC F 98003] 均由中国医学细菌保藏中心提供 稀 释 液 pH7.0氯化钠－蛋白胨缓冲液（按《中国药典2010年版》规定方法配制） 验证方法及结果 菌 液 制 备 接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌至营养肉汤培养基中，33±2℃培养24小时；接种白色念珠菌至改良马丁培养基中，25±2℃培养48小时；接种黑曲霉菌至改良马丁琼脂斜面25±2℃培养7天（用0.9％无菌氯化钠溶液洗脱孢子，标准管比浊）。以上培养物均用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml 含50～100cfu的菌悬液。 供 试 液 制 备 取供试品10g，加稀释液至100ml，制备成1:10供试液。 菌数回收率测定 平皿法 结果见表Ⅰ （1） 试验组 取1：10供试液1ml和试验菌50～100cfu，采用平皿法进行菌数测定。 （2） 菌液组 测定所加的试验菌数。 （3） 供试品对照组 取1：10供试液1ml，按试验组方法（不加试验菌），测定供试品的本底菌数。 表Ⅰ平皿法回收率（%）试验结果 试验结果 菌株名称 试 验 次 数 试验组菌数 供试品对照组菌数 菌液组菌数 回 收 率 % 平皿编号 平 均 数 平皿编号 平 均 数 平皿编号 平 均 数 1 2 1 2 1 2 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 白色念珠菌 黑 曲 霉 注：试验组菌回收率（％） [（试验组菌数－供试品对照组菌数）/菌液组菌数]×100％ 标 准 规 定 试验组菌的回收率应不低于70%。 试 验 结 果 表Ⅰ试验结果表明，试验组菌的回收率均高于70％，可采用平皿法 （1ml/皿）进行细菌数、霉菌和酵母菌数检查。 2. 控制菌检查方法验证 试验组 结果见表Ⅱ （1） 取1：10的供试液10ml和大肠埃希菌试验菌液1ml，加入到100ml胆盐乳糖 增菌培养基中，依据大肠埃希菌检查法试验。 （2） 取1：10的供试液1ml和大肠埃希菌试验菌液1ml，加入到胆盐乳糖发酵培养基10ml中，依据大肠菌群检查法试验。 阳性对照组 结果见表Ⅱ （1）取大肠埃希菌试验菌液1ml，接种至胆盐乳糖增菌培养基（BL）100ml中，依据大肠埃希菌检查法试验。 （2）取大肠埃希菌试验菌液1ml，接种至胆盐乳糖发酵培养基10ml中，依据大肠菌群检查法试验。 阴性对照组 结果见表Ⅱ 取相应的稀释液接种至相应培养基中，不加菌液，依据各控制菌检查法试验。 组别 菌株名称 试 验 组 结 果 （ 检出 ） 接菌 数量 cfu 培 养 基 分离平皿及生化试验 分离平皿 生 化 试 验 大肠埃希菌 组别 BL MUG 靛基质 试验组 100ml + + + 阳性组 100ml + + + 阴性组 100ml - - - 大肠埃希菌 大肠菌群） 组别 BL发酵 EMB 乳糖发酵管 试验组 10ml 产酸 产气 疑似菌落 产酸 产气 阳性组 10ml 产酸 产气 疑似菌落 产酸 产气 阴性组 10ml - 未生长 表Ⅱ 控制菌检查方法验证结果 注: “+”表示培养基有菌生长或呈阳性；“－”表示培养基无菌生长或呈阴性 Page 3 of 4