生化实验基本操作解析.ppt

生化实验基本操作技术 基本操作技术内容 常用玻璃器皿的洗涤方法㈠ 使用过的玻璃器皿洗涤（常规洗涤方法） 倒掉内容物→自来水冲洗→温肥皂水冲洗→自来水冲洗→蒸馏水冲洗三次 新购置的玻璃器皿洗涤 2%盐酸浸泡数小时→自来水冲洗→常规洗涤 血清堵塞刻度吸管洗涤 7.5mol/L尿素清洗→常规洗涤 油污烧杯试管洗涤 去油脂→常规洗涤 （去油脂方法：将量器倒放于具有强吸水力的几层厚纸上，置100℃烤箱中烘烤半小时，使油脂溶化由厚纸吸收，再置碱性溶液中煮沸趁热洗刷，即可除去油脂）。 常用玻璃器皿的洗涤方法㈡ 污染玻璃器皿洗涤 浸泡在杀菌剂（5%煤酚皂液）中过液→常规洗涤 染料污染玻璃器皿洗涤 清水清洗→3%盐酸乙醇溶液清洗→常规洗涤 微量元素测定用玻璃器皿洗涤 单独清洗→稀盐酸浸泡→去离子水冲洗→常规洗涤 量器类玻璃器皿洗涤 立即清洗→晾干→铬酸洗液浸泡4～6h→自来水冲洗→蒸馏水冲洗 比色杯洗涤 自来水冲洗→蒸馏水冲洗 （洗不净可用3.5mol/L HNO3溶液或（0.3～0.6）mol/L HCl冲洗，禁用毛刷或强氧化剂或超声波洗涤） 干燥—自然干燥、烘烤干燥 量器自然凉干，容器烘干备用。 洗涤、干燥原则与判断方法 玻璃器皿洗涤原则： 对不同玻璃器皿，采用不同的洗涤方法。根据器皿污染源的不同选择合适的洗涤液。 玻璃器皿干燥原则： 量器自然凉干，容器烘干备用。 器皿清洁的判断方法： 洗涤后倒置容器，其内壁无挂珠；干燥后器壁内外干净、无污物痕迹。 溶液的混匀技术 甩动混匀适用于试管内液量不多的溶液混匀。 弹打混匀适用于锥形离心管、小试管和小塑料离心管等内容物的混匀。 旋转混匀适用于未盛满溶液的锥形瓶、试管和小口容器等内容物的混匀。 倒转混匀适用于具塞容器，如容量瓶、具塞量筒和具塞离心管等内容物的混匀。 玻棒搅拌混匀适用于烧杯内容物的混匀。 吸管混匀适用于样品不同浓度等级稀释的混匀。 旋涡振荡器混匀适用于锥形离心管、小试管和小塑料离心管等内容物混匀。 电磁搅拌混匀适用于酸碱自动滴定、pH梯度滴定等。 刻度吸管的使用 选管（大小合适）总容量等于或稍大于取液量 执管（左球右管） 取液（一下一上） 插入液面下0.5cm，吸至最高刻度上方1～2cm 调准刻度（三点一线） 溶液弯月面、视线和刻度线在同一水平上 放液（贴壁放液） 需要吹的则吹出，如要求不吹的则让吸量管尖端停靠内壁约15s，同时转动吸管，重复一次。 放置（放回吸管架） 禁止平放在实验台面上！ 洗涤（操作结束后） 可调式微量加样器的使用 选择（大小合适） 设置量程(动作轻缓） 先确定调节轮的方向，再调至大于或小于所需值一格，最后调回所需值。 装吸嘴（套牢，避免间隙） 取液（按至第一停点，缓慢吸液） 放液（贴壁放液）先按至第一停点，再按至第二停点。 卸吸嘴（废物缸） 将数轮调回最大值 放置（放在固定支架上，严禁平放或倒置） 容量瓶的使用 检漏 如不漏水，即可使用 洗涤 若有需要，可先用洗液浸洗，再用自来水、纯水洗净。 转移 玻璃棒引流、重复吹洗玻璃棒和烧杯内壁3次以上。 稀释 加水至容积的3/4左右，先混匀，再继续加水至距离标线下1cm处，等1～2min，再用滴管加水至标线。 摇匀 盖上瓶塞，左手按住塞子，其余手指拿住瓶颈标线以上部分，用右手托住瓶底边缘，将瓶倒转，使气泡上升顶，振荡、混匀，再将瓶直立过来，反复10次左右。 容量瓶使用的注意事项 1.不要将其磨口玻璃塞随便取下放在桌面上，以免玷污或再次盖上时配错容量瓶，可用橡皮筋或细绳将瓶塞系在瓶颈上。 2.不宜长期保存试剂溶液，尤其是碱性溶液，会侵蚀瓶塞使其无法打开。配好的溶液需作保存时，应转移至清洁干燥的试剂瓶中。 3.使用完毕应立即用水冲洗干净，如长期不用，磨口处应洗净擦干，并用纸片将磨口隔开。 4.容量瓶不得在烘箱中烘烤，也不能在电炉等加热器上直接加热。如需使用干燥的容量瓶时，用乙醇等有机溶剂荡洗后晾干或用电吹风的冷风吹干。 南方医科大学 生物化学与分子生物学实验教学中心 2012年秋季学期 * 2012年秋季学期 生物化学与分子生物学实验教学中心 玻璃器皿的洗涤 溶液的混匀技术 吸量管、加样器和容量瓶的使用 1 2 3 吸量管操作执管姿势 放液示意图 图A：把按钮压至第一停点， 图B：垂直握持加样器，使吸头浸入液面下3-5毫米处，然后缓慢 平稳地松开按钮，吸入液体。图C：将吸头口贴到容器内壁底部并保持倾斜，平稳地把按钮压到 第一停点 。 图D：压住按钮，同时提起加样器，使吸头贴容器壁擦过。 图E：松开按