【参考】牙发生发育分子机理及牙齿再生研究.Doc

一、研究内容 关键科学问题 1 阐明牙齿发育过程中上皮-间充质细胞相互作用关键基因及最适成牙微环境； 2 探讨牙源性上皮及间充质干细胞的发育起源及牙向分化机制； 3 探索用于牙再生种子细胞（上皮及间充质细胞）的替代细胞； 4 重建牙再生的微环境，在大动物体内用牙源性干细胞及非牙源性成体干细胞复合生物支架材料进行牙再生研究。 主要研究内容 本项目是围绕牙齿发育和再生进行相关的基础研究，首先要研究并明确牙齿发生、发育的分子调控机理，为全牙再生提供理论依据和实验指导，并为牙发育和牙再生相关干细胞的分化调控及其机理研究奠定基础；同时，研制适于牙齿各种组织成份构建的生物支架材料，为实现牙齿再生奠定实验基础；上述各研究是有机结合、循序渐进的系统，其最终目标是明确牙齿发育机理并实现牙的再生。 本项目包含以下主要研究内容： 1 牙发育中上皮-间充质细胞相互作用分子机制及微环境的影响 在建立牙胚上皮-间充质离解重组体外培养模型的基础上，应用基因敲除、转基因和RNAi等技术探讨FGF、TGF-βs、BMPs、Wnt、Shh等在牙胚发育中的作用机制；观察不同外部微环境对于牙胚上皮二、预期目标 项目总体目标 围绕口腔医学和再生医学发展的重大科学问题，阐明牙发生发育过程中上皮-间充质相互作用机制及微环境对成牙相关干细胞的调控机理，建立牙源性和非牙源性干细胞牙向诱导分化体系，并基于牙发育机理和牙再生微环境的研究探索牙齿再生，重点研究牙根再生和生物性牙根，为临床牙齿缺失修复提供科学依据。通过本项目的研究，搭建牙发育和牙再生研究平台，培养和建立一支学术水平高、创新能力强的研究人才队伍使我国在相关领域的研究国际 三、研究方案 总体研究方案 进行牙齿再生，首先必须了解牙齿生长发育中上皮-间充质细胞相互作用机理，阐明牙源性和非牙源性干细胞定向分化诱导及其机制，并解决牙再生微环境和种子细胞来源等关键问题，因此，本项目总体方案如下： 首先明确牙发生发育中上皮-间充质细胞相互作用分子调控机制； 明确牙源性干细胞成牙分化机制； 寻找牙再生种子细胞来源，进行非牙源性干细胞牙向分化研究； 基于牙齿发育原理在大动物体内进行牙再生研究，重点研究牙根再生和生物性牙根。 技术路径 创新点和特色 1 理论创新：本项目针对牙齿发育机制和牙再生微环境等关键科学问题进行研究，有望阐明牙发生发育过程中上皮-间充质相互作用机制，提出新的理论，发现新的关键调控基因；明确微环境对牙再生的影响；探索出牙再生种子细胞新的来源及其牙向诱导分化体系。以上研究均为国内外前沿研究，为建立牙再生新理论和新技术提供科学依据，具有原始创新性。 2 技术创新：本项目将首次建立牙齿再生的微环境体系；研制出适用于牙再生的生物支架材料；利用成牙相关干细胞重建具有发育能力的牙胚；在大型动物（小型猪）进行牙再生研究。在技术上具有首创性。 3 研究特色：通过对牙齿发育过程中上皮-间充质相互作用机制与牙齿再生的研究，将为机体其他器官发育与再生提供科学依据。利用小型猪这种大动物进行牙再生研究，重点研究牙根再生和生物性牙根，有望为临床应用奠定基础。 可行性分析 本项目组在牙齿生长发育及再生领域有雄厚的研究基础，基本包括了国内牙齿发育与再生及组织工程领域的重要研究团队，已获得大量的重要研究成果，论文发表于Lancet、Dev Cell、Stem Cells、PNAS、JBC等杂志上。 1 理论和方法可行： 上皮-间充质的相互作用是牙齿发育的核心与关键并贯穿于牙齿发育的全过程。牙源性上皮与牙源性或非牙源性间充质干细胞复合形成牙齿样器官，以及非牙源性上皮表达牙源性上皮诱导信号的研究成果为我们在非牙源性细胞中找寻细胞来源提供了有力的理论依据。在适宜的诱导条件下，非牙源性的表皮干细胞和间充质干细胞可分化为具有成牙能力的细胞。重组技术是研究机体发育中多种组织相互作用、相互诱导的重要方法，牙齿再生研究采用重组技术已获得不少可喜的成果。所以将成牙相关干细胞应用于牙齿再生研究显示了较强的理论可行性。 2 有前期研究工作基础： 本项目组在牙齿发生发育研究领域具有较好的研究基础，从牙发生发育的各个阶段，系统全面地探讨了多种信号通路及关键基因在牙发育中的作用；本项目组已成功掌握牙胚体外离解重组的技术，并发现牙胚间充质的完整性在维持牙胚的发育方面起了关键的作用；前期关于小型猪牙齿生长发育组织学图谱已基本建成，现正尝试进行小型猪牙胚的体外培养。 通过对牙再生的研究发现牙胚间充质的完整性在控制牙外形的正确性上起到至关重要的作用，在牙周及生物牙根再生领域已有多项突破性成果，首先分离牙髓干细胞、牙周膜干细胞和脱落乳牙干细胞，相关成果发表在国际著名杂志Lancet、PNAS上。在小鼠体内已成功再生生物牙根，在全牙再生