对虾养殖生物学04(WSSV)要点分析.ppt

白斑综合症病毒的形态和分子生物学 1992年台湾省北部、1993年日本爆发了对虾病毒病。 以为不同病毒所致，给出专门的名字： 皮下及造血组织坏死杆状病毒(hypodermal and haematopoietic necross baculovirus) 第Ⅲ斑节对虾无包含体杆状病毒(third Penaeus monodon non-occluded baculovirus, PmNOB) 日本对虾杆状核型病毒(rod-shaped nuclear virus of Marsupenaeus japonius, PV-P) 对虾杆状DNA病毒(Penaeid rod-shaped DNA virus) 系统性外胚层和中胚层杆状病毒或白点杆状病毒等。 后来发现，全为一种病毒，正式统称为白斑综合症病毒（white spot syndrome virus, WSSV）。我国80%和世界大部分地区对虾死亡的罪魁祸首皆为WSSV。 WSSV的形态学 WSSV的结构蛋白 有40多种蛋白质，在转录调节病毒增殖和/或DNA复制调节过程中，还有结构蛋白。WSSV病毒体内至少有38种结构蛋白，其中膜上有21种，核衣壳中有10种，间层膜和核衣壳之间有5种。 在膜蛋白VP31、VP110和VP281、间层蛋白VP36A和核衣壳蛋白VP664上有细胞附着基序，对病毒进入细胞有重要作用。其它蛋白（如VP28、VP39B、VP41A、VP51 A、VP51B、VP68、VP124、VP150、VP187、VP281和VP292）和胶原状蛋白位于膜内；而蛋白VP35、VP466、VP15和VP76位于核衣壳上，具有不同的功能。 抗体分析表明，VP28和VP24可能与病毒的穿透作用有关。最近发现，对虾血细胞中的25-Kda 膜蛋白能结合到重组VP28，即WSSV病毒体上。这种蛋白质与小分子GTP-结合蛋白Rab7高度同源。以Rab7抗体进行的中和试验表明，它能抑制WSSV病毒体与细胞结合，减少WSSV感染后的死亡。 用RNA干扰法研究 与VP19相对应的长双链RNA能诱导凡纳滨对虾特殊的抗病毒反应，抑制WSSV感染，大幅度降低死亡率。 而相应的VP28、VP281、WSSV蛋白激酶（PK）及不相关的绿色荧光蛋白的长双链RNA能提高中国明对虾的成活率，用VP28和PK双链 RNA处理的对虾成活率最高。连续3次注射短小的VP28干扰RNA，完全抑制了WSSV对日本对虾的感染。 WSSV基因组含531-684个阅读框，具ATG启动密码子，其中181-184阅读框编码含51-6077个氨基酸组成的功能蛋白，相当于基因组遗传信息的92%。约21%-29%的阅读框编码WSSV蛋白，即与其他已知蛋白相同。这些蛋白包括核酸代谢和DNA复制酶，如DNA聚合酶、非特异性核酸酶、核苷酸还原酶的大小亚基、胸苷激酶、胸苷酸激酶、嵌合的胸苷-胸苷酸激酶、胸苷酸合成酶、dUTP酶和两种激酶。推测还有其他功能蛋白，如胶原状蛋白、鞭毛蛋白、几丁质酶、蛹壳状蛋白、细胞表面絮状蛋白、kunitz状蛋白酶抑制因子1类细胞因子受体、sno状肽和嵌合抗凋亡蛋白。有3个阅读框（泰国隔离群的151、366和418）可编码WSSV潜伏期的蛋白。 WSSV还有3个能立即转录的即时早期基因（台湾隔离群的26、242和418阅读框）。这些基因独立转录，与寄主细胞从头合成的病毒蛋白无关，在体外直接表达。这些即时早期基因在感染期间决定寄主范围，调节反式作用因子。 编码DNA复制和核苷酸代谢所需的蛋白在病毒复制初期即开始了转录合成。初期转录的WSSV基因一般具有TATA框，转录起始位点上游具有20-30核苷酸。结构蛋白是在感染后期合成的，一般有简并TIS基序（A/TNAC/G）），该序列位于富含A/T区下游25个碱基的位置，与节肢动物的TIS基序相似。WSSV有一个内核糖体进入位点（IRES）元件，它能使以双顺反子形式构建的谷胱甘肽S转移酶（GST）和绿色荧光蛋白（GFP）在体外同时有效地表达。 WSSV品系的遗传性、抗原和毒力 泰国、中国大陆和台湾WSSV隔离群的核苷酸序列有99.3%相同。WSSV基因组的不同区域表现出重要的序列变异。我国WSSV基因组有9.63kbp的不稳定区，依寄主的不同发生了不同程度的缺失，使致毒力发生了变化。还有人认为，不同WSSV隔离群的毒力和竞争性适应的差异取决于基因组的大小：基因组最大的WSSV（312 kbp）致毒力最低（半致死时间=12d），竞争性适应程度最小。这与生长中观察到的发病期对虾的死亡率不同有关。 WSSV的形态发生 1期：细胞感染初期。被感染细胞的细胞核略膨大。病毒颗粒形成之前先出现病毒核小体。病毒颗粒由纤维状的病毒蛋白形成。细胞质中内质网膨大，具有大