论文名称(中文) 细胞自噬藉由正向调控miR.docVIP

論文名稱 中文 細胞自噬藉由正向調控miR-449a參與大腸直腸癌之致癌機轉 論文名稱 英文 An autophagy up-regulated microRNA miR-449a participates in the tumorigenesis of colorectal cancer 研究生 中文 林紓晴 研究生 英文 Shu-Ching Lin 中文摘要 細胞自噬是一種壓力引起的代謝過程，老化或損壞的胞器會被降解，並將能量重新釋出以維持細胞存活。細胞自噬在癌症進程中可抑制腫瘤發生，也可保護癌細胞免於受到飢餓所引發的凋亡。MicroRNAs miRNAs 是一種非編碼核之小片段RNA，可藉由和其標的mRNA的3-UTR 片段結合直接將其RNA降解或抑制基因轉錄。MiRNA在腫瘤的生成中亦扮演雙重角色，然而其中詳細的機制尚未釐清。細胞自噬反應是否可能經由調控特定之微小RNA miRNA 影響腫瘤之生成?經由microRNA microarray的搜尋找到和細胞自噬呈正相關的微小RNA-miR-449a。利用定量即時反轉錄聚合酶鏈鎖反應分析70對大腸直腸癌病人的檢體，發現miR-449a之表達量和大腸直腸癌的分期、轉移及復發呈負相關，且在接收操作特徵曲線分析中指出miR-449a是很有潛力做為大腸直腸癌分期及復發的生物標記。藉由誘導子amiodarone 原抗心律不整藥物 誘導大腸直腸癌SW480細胞之自噬反應可促進miR-449a表現。此外正常情況下，Forkhead轉錄因子家族中之FoxO1會被p300蛋白乙醯化而存在於細胞質中；細胞處於飢餓時，FoxO1則從細胞質中進入細胞核。進一步研究發現amiodarone誘導的自噬反應伴隨著p300表現下降，以及核內的FoxO1表現量顯著增加。我們在miR-449a之啟動子區域預測到數個FoxO1的結合序列。由此推論細胞自噬透過降解p300促使FoxO1入核，並啟動miR-449a啟動子的活化。CyclinD1和 LEF-1是miR-449a已知的標的基因。細胞株實驗發現增加miR-449a表現或以amiodarone誘導自噬反應均能透過抑制LEF-1及cyclinD1之表現進而影響SW480細胞的細胞週期進行、增殖、細胞群落形成、爬行及入侵能力。此外細胞自噬亦可不經miR-449a直接造成LEF-1和cyclinD1的表現下降。Amiodarone 誘發之自噬反應抑制腫瘤的生成在小鼠之腫瘤實驗中亦得到証實。此外利用原位雜合及免疫組織化學染色法技術分析在小鼠腫瘤及18對大腸直腸癌tissue array中發現在腫瘤部分的miR-449a 以及細胞自噬相關基因Beclin 1表現量均明顯下降，相對的p62、LEF-1以及cyclinD1的表現量在腫瘤部分中則明顯較高。綜述之，本研究為第一篇報導細胞自噬所誘導的miR-449a會抑制大腸直腸癌發生。其機轉可能經由FoxO1入核促進miR-449a的基因轉譯。且其和大腸直腸癌中LEF-1、cylinD1表現量、復發及轉移的病人呈負相關。此外amiodarone是一個相當具有潛力用來預防及治療大腸直腸癌的藥物。 英文摘要 Autophagy is a stress-induced catabolic process to degrade organelles, proteins and to release energy for maintaining cell survival. Autophagy either suppresses tumor formation or prevents cancer cells from starvation-related death. MicroRNAs miRNAs are small none coding RNAs, which bind to the 3-UTR region of the target gene and cause degradation of mRNA or inhibition of translation. MiRNAs also play critical roles during cancer formation. However, the underlying mechanism remains elusive. We hypothesize that autophagy may affect tumorigenesis through regulation of miRNAs. We previously identified an autophagy up-regulated miRNA miR-449a by miRNA