安徽农业大学基因工程.docVIP

复 习 题 为什么说基因工程技术是上世纪60年代末70年代初发展起来的？因为：（1）1967年发现了连接酶；（2）大肠杆菌的转化技术是1970年获得突破；（3）限制性内切核酸酶的分离始于1970年；（4）Berg在1972年构建了第一个重组的DNA分子。DNA 的两种酶，即分解DNA的限制酶和改变DNA 碱基结构使其免遭限制酶分解的修饰酶，这两种酶作用于同一DNA的相同部位，把这两种酶所组成的系统称为R-M system。不同种的细菌或不同的细菌菌株具有不同的限制酶和修饰酶组成的R-M system。修饰的本质是通过甲基化酶将DNA中某些碱基进行甲基化修饰，由于宿主自身DNA上的这些位点进行了修饰，限制酶就不能进行切割，而外来的DNA在相应的碱基上没有被甲基化，宿主的限制酶通过对该位点的识别来分辨敌我，并将入侵的外来DNA分子降解掉。所以DNA的限制和修饰作用为细菌提供了保护，它是通过对外源DNA 的限制和对自身DNA的修饰实现的。 碱性磷酸酶的种类、差别及用途？CIP的活性比BAP高10-20倍，且加热到68℃就可完全失活，而BAP却是耐热酶，耐酚抽提。用途：（1）dsDNA的5’端脱磷酸，防止线性载体DNA的自身环化。（2）DNA和RNA脱磷酸后，用于多核苷酸激酶进行5’末端标记。 如何利用T4DNA聚合酶制备平末端？T4 DNA聚合酶具有5，-3，合成酶活性和3，-5，外切核