仪分第15、16、17章色谱法程序.ppt

每种色谱方法通常存在一种起支配作用的保留机理。但可能还存在次要的其它机理。如分配色谱也可能存在某些吸附作用，乃至离子交换作用。各、色谱方法在相关领域应用互相补充，分子量大于10000的溶质采用排阻色谱分离，现在也可用反相色谱分析，分子量较低的离子型化合物广泛采用离子交换色谱，低分子中等极性、非离子型溶质及同系物最好使用分配色谱，吸附色谱常用语分离非极性化合物、结构异构体及不同类化合物分离，如脂肪醇与烃分离。 采用生物体液相似组成和PH的水溶液为流动相，与生物组织类似的脂质体、各种结构的膜为固定相，构成类似生物体系的色谱分离体系，成为研究生物活性物质与生物大分子之间特异性相互作用、生物活性物质的分离纯化以及生化参数、药代动力学、生物代谢过程等的重要手段。新的学科分支-生物色谱学正在形成和发展。 气相色谱柱压小于5，仪器运行成本高于气相色谱。填料粒径3-10微米，液相色谱的固定相可以是吸附剂、化学键合固定相、离子交换树脂或多孔性凝胶；气相色谱采用的流动相是惰性气体，对组分没有亲和力，即不产生相互作用力，仅起运载作用。而高效液相色谱，流动性可选用不同极性的液体，选择余地大，对组分可产生一定的亲和力，并参与固定相的组分的竞争。因此，流动相对分离起很大作用，相当于增加了控制和改进分离条件的参数，这为选择最佳分离条件提供了极大的方便。柱前压一般为50-350×105Pa　 最初使用薄壳型填料，柱效仅每米1000-3000塔板数, 5-10um球形和无定形微粒硅胶及以其为基质的键合硅胶研制成功，匀浆高压装柱技术出现，柱效已达每米5-6万理论塔板数,高度均匀甚至单分散1-3um硅胶基质球形填料，短柱、超高压泵操作，柱效已达每米15-30万理论塔板数 液相中扩散系数比气体小4-5个数量级 气相色谱采用的流动相是惰性气体，对组分没有亲和力，即不产生相互作用力，仅起运载作用。柱前压一般为50-350×105Pa　 高效液相色谱法在常温下进行分离与分析，不会导致被测物质的热分解，其流动相是液体，所以只要试样能制备成溶液，原则上都可以用高效液相色谱法分离与分析，如离子型化合物、不稳定天然产物以及氨基酸、蛋白质等高分子化合物均可用高效液相色谱法获得较好的分离效果。 气相色谱柱压小于5，柱前压一般为50-350×105Pa。仪器运行成本高于气相色谱。液体高粘度导致柱管中心溶质迁移比管壁附近高，使色谱系统连接管柱外效应增大，气相色谱法中气体的高扩散性补偿了这种差异。控制色谱系统连接管内径小于等于0.25mm。　 选择因子增加分离时间会缩短，而容量因子增大分离时间是显著增加的。 ?从1.01增大到5，a-1/a增加近100倍(0.0099-0.8)。K从1增大到50，k/k+1从0.5变化至接近于1，只增加1倍，?2-5,分离比较容易实现.选择因子从1.1-1.2，分离度增加一倍 对于气相色谱，可以通过改变色谱柱温度来选择合适的k值以改进分离度.对于液相色谱，改变流动相的组成就能有效控制k值，对分离起到立竿见影的作用. 采用色谱法，当两种组分的差异只有1%，甚至于千分之五时就可以达到分离.从本质上看越是复杂的化合物，用色谱分离越有利，它可以使几十种甚至上百种以至于几百种化合物进行分离和分析，这是其它的分析方法做不到的。 n越大，h越小，表明组分在柱中达到的分配平衡次数越多，对分离越有利，但还不能预言各组分有被分离的可能性。 * 组分分子通过填充固定相的不规则空隙，不断改变流动方向，形成紊乱的类似涡流的流动状态，造成同一组分的分子在柱内滞留的时间不等，使色谱峰扩散的现象。 色谱分离过程的优化可通过改变各种条件来实现，其目的是在最短的时间内获得很好的分离。优化的具体目标是： 1．减小峰扩散，提高柱效 2．获得合适的流出速度 From an initial separation, improving N sharpens peaks, same retention time; primarily controlled by column length and particle size, improving k* means moving peaks to longer or shorter retention times; primarily controlled by the mobile phase and temperature; figure shows band pair with less retention or more retention by changing % organic in the mobile phase; improving a* means improving selectivity, or movi