仪器第4讲高效液相色谱法程序.ppt

3-1 高效液相色谱法的特点 1. 高效液相色谱法概述 一、概述 它是在经典液相色谱基础上，引入了气相色谱的理论，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化的特点． 为了更好地了解高效液相色谱法优越性，现从两方面进行比较： 1．高效液相色谱法与经典液相色谱法 高效液相色谱法的最大优点在于高速、高效、高灵敏度、高自动化． 液体的流动相高速通过时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对流动相施加高压15~35 Mpa，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。 2．高效液相色谱法与气相色谱法 （l）气相色谱法分析对象只限于分析气体和沸点较低的化合物，它们仅占有机物总数的20％．对于占有机物总数近80％的那些高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质，目前主要采用高效液相色谱法进行分离和分析． (2)高效 GC 1000塔板/m(填充柱） HPLC 3W 塔板/m 　(3)气相色谱一般都在较高温度下进行的，而高效液相色谱法则经常可在室温条件下工作． 总之，高效液相色谱法是吸取了气相色谱与经典液相色谱优点，并用现代化手段加以改进，因此得到迅猛的发展． 高效液相色谱与气相色谱的比较 液相色谱仪器 high performance liquid chromatograph 3.高效液相色谱法的应用? 1. 药物分析约80%的药物都能用高效液相色谱进行分离和纯化。特别是手性药物的分离分析。 2. 食品分析 ①食品本身组成, 特别是营养成分，如糖、有机酸、维生素、蛋白质、氨基酸、脂肪的分析； ②食品添加剂，如防腐剂、抗氧化剂、合成色素、甜味剂和保鲜化学物质的分析； ③食品污染物，如农药残余和黄曲霉素等的分析。 3. 制备分离应用要制备或提取一些高纯化合物，如新合成化合物的结构鉴定，药物的生物和毒理试验。 4. 高效液相色谱法的特点 高压 （150×105~350×105 Pa） 高速 （in 1 hr） 高效 （3w/m) 高灵敏度 (UV-ng; FL-10pg; μTAS) 人参、西洋参与三七的鉴别 3-2 影响色谱峰扩展及色谱分离的因素 H=A+B/μ+Cμ 高效液相色谱中的速率方程 涡流扩散项 纵向扩散 流动相传质 滞留区传质 固定相内传质 2. 对速率方程的讨论 选用细颗粒填料可获高柱效（5μm） 流动相流速低，有利于达到高柱效 选用黏度小的流动相有利于提高柱效 温度的影响(适当提高柱温以降低流动相黏度） 液膜厚度的影响 3. 柱外效应 3-3 高效液相色谱的类型及其分离原理 液—液分配色谱及化学键合相色谱 液—固吸附色谱 离子交换色谱 离子色谱 空间排阻色谱 分离原理：利用组分在两相中溶解度的差异 固定相：载体+固定液 早期物理或机械法涂渍固定液，由于易流失已较少采用； 现在应用最广的是化学键合固定相：将各种不同基团通过化学反应键合到担体（硅胶）表面的游离羟基上。 液—液分配色谱 固定液类型：β, β’ —氧二丙腈、聚乙二醇、角鲨烷等。 液—液色谱流动相应尽可能不与固定液互溶，两者的极性差别应很大。 固定液为极性、流动相为非极性的液—液色谱称为正相色谱，反之，则称为反相色谱。 正相色谱——固定液极性 流动相极性（NLLC） 极性小的组分先出柱，极性大的组分后出柱 适于分离极性组分 反相色谱——固定液极性 流动相极性（RLLC） 极性大的组分先出柱，极性小的组分后出柱 适于分离非极性组分 液—液分配色谱 应用：液—液色谱能分离多种类型化合物，如烷烃、烯烃、芳烃、染料、甾族化合物等。 利用化学反应将固定液的官能团键合在载体表面 1．分离原理：分配 + 吸附（以LLC为基础） 2．特点： 不易流失 热稳定性好 化学性能好 载样量大 适于梯度洗脱 2、 液-固吸附色谱liquid-solid adsorption chromatography 分离原理：利用溶质分子占据固定相表面吸附 活性中心能力的差异 分离前提：K不等或k不等 液—固吸附色谱 固体吸附剂主要类型： 极性的硅胶（应用最广） 氧化铝 分子筛 非极性的活性炭 液—固吸附色谱 应用： 分离极性不同的试样 分离含极性基团相同但数目不同的试样 分离异构体 3、 离子交换色谱ion-exchange chromatography 离子色谱