SNP检测方法(讲课版)2概要.pptVIP

CCR(combined chain reaction ) 基本步骤 1、DNA模板的变性 2、引物和单链模板间的退火 3、DNA聚合酶(无5′- 3′外切酶活性) 催化引物延伸 4、延伸引物的3′端和下游引物5′端间的连接。 优点： 1.快速简单，仅需DNA 的分离、CCR 扩增、琼脂糖凝胶电泳检测产物几步 2. 产生的产物片段大, 通过琼脂糖凝胶电泳就可实现对产物的检测（不需引物标记等繁琐技术） LRCA(ligation-rolling circle amplication） 基本原理与步骤 1.通过对挂锁探针(开口的环状探针,padlock probe) 的连接来区分碱基多态性位点, 2.利用滚环扩增对信号放大实现检测 优点：不需预扩增，同管反应和检测，灵敏度提高（滚环扩增的扩大作用） 3）限制性内切酶 4）外切酶FEN（Invader assay） 基本步骤和原理 1.插入复合物的形成：插入探针和信号探针均和靶DNA模板互补杂交，信号探针的5′端和插入探针的3′端产生至少一个碱基的重叠,从而产生插入复合物(invasive complex) 结构 2.插入复合物被特异性的外切酶FEN 所切割,将信号探针的5′端重叠部分切除,5′端的切除常和荧光信号的改变相连作为检测的手段,或者也可以用质谱分析来检测。 3. 位点出现的错配将大大降低FEN 的切割速率,只能达到正