第五章化学发光免疫分析.pptVIP

第五章 化学发光免疫 分析技术 第一节 慨 述 　一、化学发光 　二、化学发光效率 第二节 化学发光剂和标记技术 　一、化学发光剂 　二、发光剂的标记技术 第三节 化学发光免疫分析的类型 一、直接化学发光免疫分析 二、化学发光酶免疫分析 三、电化学发光免疫分析 四、临床应用 生活中常见的化学发光现象 鲁米诺与氢氧化物反应时生成了一个双负离子（Dianion），它可被过氧化氢分解出的氧气氧化，产物为一个有机过氧化物。该过氧化物很不稳定，立即分解出氮气，生成激发态的3-氨基邻苯二甲酸。激发态至基态转化中，释放的能量以光子的形式存在，波长位于可见光的蓝光部分。 分析步骤 化学发光免疫分析的优点 1、灵敏度高： 这是CLIA关键的优越性，其灵敏度可达10-16/-21mol/L（RIA为10-12mol/L）。又如化学发光底物（如AMPPD）可检测出的碱性磷酸酶的浓度比显色底物要灵敏5х105倍。 2．线性范围宽： 发光强度在4～6个量级之间与测定物质浓度间呈线性关系。这与显色的酶免疫分析吸光度（OD值）为2.0的范围相比，优势明显。也优于放射免疫分析技术。 3、安全性好： 彻底消除了放射性危害，环保、安全。 到目前为止，还未发现CLIA的危害性。 4、试剂有效期长 有效期可长达1年以上，放射免疫分析由于放射性同位素的衰变，一般有效期只有一个月，而酶免的底物贮存性差，都无法与化学发光相比，有效期长可以降低使用成本，利于推广应用。 5、光信号持续时间长 辉光型（glow type）的CLIA产生的光信号持续时间可达数小时甚至一天。简化了实验操作及测量。容易实现连续、动态、重复测定 6、分析方法简便快速 绝大多数分析测定均为仅需加入一种试剂（或复合试剂）的一步模式，容易实现自动化。 7、结果稳定、误差小 样品系直接自己发光，不需要任何光源照射，免除了各种可能因素（光源稳定性、光散射、光波选择器等）给分析带来的影响，使分析结果灵敏稳定可靠。 8、临床应用广 1）甲状腺激素 2）生殖激素 3）肾上腺/垂体激素 4）贫血因子 5）肿瘤标记物 6）感染性疾病 7）糖尿病 8）心血管系统 9）病毒标记物 10）骨代谢 11）过敏性疾病 12）治疗药物监测 1．什么是发光免疫分析？什么是化学发光免疫分析？ 2．化学发光与荧光的区别？化学发光反应的条件？ 3．什么叫化学发光剂？化学发光剂必须具备那些条件？ 4．吖啶酯化学发光的原理和特点是什么？ 5．酶促反应的发光剂有哪些？其发光原理和特点是？ 6．三联吡啶钌发光的原理和特点是什么？ 7．三丙胺在电化学发光中起什么作用？ 8. 发光剂的标记有那些方法？影响因素有那些？ 9．什么是直接化学发光免疫分析？其特点是什么？ 10．什么是化学发光酶免疫分析？其特点是什么？ 发光是指分子或原子中的电子吸收能量后，由基态跃迁到激发态，然后再返回到基态，并释放光子的过程。化学发光是吸收了化学反应过程中所产生的化学能使分子激发而发光。化学发光免疫分析是将化学发光与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的标记免疫分析技术，分为直接化学发光免疫分析，化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析。 用吖啶酯直接标记抗体(抗原)，与待测标本中相应的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-吖啶酯标记抗体复合物，这时只需加入氧化剂（H2O2）和NaOH使成碱性环境，吖啶酯在不需要催化剂的情况下分解、发光 。 由集光器和光电倍增管接收、记录单位时间内所产生的光子能，这部分光的积分与待测抗原的量成正比，可从标准曲线上计算出待测抗原的含量。 一、直接化学发光免疫分析 发光 Y Y Y 磁微粒 被测抗原 + 抗体 + 带丫啶酯标记物抗体 Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y 冲洗后 --- 夹心法 （1） 加入H2O2 （pH10） （2） 加入碱 （pH10） 直接化学发光的机理 磁微粒模式图 Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y 特点 抗原和抗体结合与未结合部分的易分离 磁微粒技术 化学发光酶免疫分析（chemiluminescence enzyme 　immunoassay，CLEIA）是用参与催化某一化学发光反应的酶如辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶(ALP)来标记抗原或抗体，在与待测标本中相应的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，经洗涤后，加入底物(发光剂)，酶催化和分解底