动物生物化学第4章 核酸.ppt

第4章 核酸Nucleic acids 通过同源性比较,研究不同物种或个体DNA之间的亲缘关系； 通过杂交的严紧性,发现基因的缺失或突变； 通过标记信号的强度,测定某种遗传信息量的多少； 证明某种疾病(如肿瘤)是否与某种基因(如病毒基因)有关。 用于鉴定DNA的Southern印迹技术 用于鉴定RNA的Northern印迹技术 原位杂交技术 基因芯片技术等 将在第17章中介绍 影响Tm值的因素 1.溶液的性质 2.DNA中碱基组成的影响 大肠杆菌DNA在不同浓度KCl溶液下的熔融温度曲线 3.4 复性 复性：变性DNA分开的两股链在适当条件下重新生成双链结构的过程 退火（annealing）:热变性的DNA经缓慢冷却复性的过程。 3.5 分子杂交 当两条不同来源的DNA（或RNA）链或DNA链与RNA链之间存在互补的碱基序列时，在一定条件下可以通过互相配对形成双螺旋分子，这种分子称为杂交分子。形成杂交分子的过程称为分子杂交（molecular hybridization） 。 核酸探针（nucleic acid probe）:某一具有特定序列并且用同位素或其他化学方法标记的DNA或RNA片段。通常是人工合成的。 分子杂交图 3.5 分子杂交技术的应用 利用核酸探针，可以： 以分子杂交为基础建立起的分子生物学研究技术有： 本章结束 * * 本章主要内容 核酸的化学组成 核酸的结构 核酸的理化性质 核酸（Nucleic acids）—— 19世纪60年代，由Miescher发现。1889年Altmann将其纯化，证明核酸是含磷的酸性生物大分子。20世纪40年代，Avery确定核酸是遗传信息的载体，普遍存在于生命有机体中。 脱氧核糖核酸，DNA （Deoxyribonucleic Acid），在原核细胞是核质的成分，在真核细胞DNA与蛋白质结合形成染色体，少量存在于线粒体。一个生命有机体的每个体细胞（除生殖细胞外）都含有相同质和量的DNA，包含了它的全部遗传信息。 核糖核酸，RNA （Ribonucleic Acid）主要存在于胞液内，真核细胞的核仁和线粒体也含有少量RNA。RNA的量是变动的。主要有信使RNA（mRNA），转运RNA（tRNA）和核糖体RNA（rRNA）。 病毒或者是DNA病毒或者是RNA病毒。 1.核酸的化学组成 核酸，DNA或RNA，经核酸酶水解生成单核苷酸。 单核苷酸是组成核酸的基本单位。 核苷酸进一步分解生成碱基、核糖（或脱氧核糖）和磷酸。 核酸 低聚核苷酸 单核苷酸 磷酸 核苷 碱基 核糖 核酸的水解过程 1.1 碱基(base) 核酸中的嘧啶碱基 核酸中的嘌呤碱基 其他的稀有碱基 1.2 核糖(ribose) DNA含脱氧核糖 RNA含核糖 1.3 核苷 (nucleoside) 核苷（上）与脱氧核苷（下） 1.4 核苷酸 (nucleotide) 核糖核苷酸（上）与脱氧核糖核苷酸（下） 腺嘌呤核苷三磷酸（ATP） 3′，5′- 环状腺苷酸（cAMP） ? DNA RNA 嘌呤碱 腺嘌呤 腺嘌呤 鸟嘌呤 鸟嘌呤 嘧啶碱 胞嘧啶 胞嘧啶 胸腺嘧啶 尿嘧啶 戊糖 D-2′-脱氧核糖 D-核糖 酸 磷酸 磷酸 DNA分子和RNA分子中化学组成的差别总结 2.核酸的结构 2.1 核酸中核苷酸的连结方式 DNA片段 RNA片段 注意 核苷酸之间的连接方式是3’，5’-磷酸二酯键 2.2 DNA DNA分子的大小 天然存在的DNA分子最显著的特点是很长，分子质量很大，一般在 106-1010 。 DNA的碱基组成有如下特点： 具有种的特异性。 没有器官和组织的特异性。 在同一种DNA中，A=T 、G = C+m5C，即A+G = T+C+mC， 即嘌呤碱基的总摩尔数与嘧啶碱基的总摩尔数相等——碱基当量 定律又称Chargaff原则。 年龄、营养状况、环境的改变不影响DNA的碱基组成。 2.3 RNA mRNA：占细胞中RNA总量的3%-5%，分子量大小不一，不稳定，代谢活跃，更新迅速，是合成蛋白质的模板。 rRNA：细胞中含量最多的RNA，70%-80%, 核糖体的组成成分。 tRNA：约占细胞中RNA总量的15%。约由75-90个核苷酸组成。蛋白质合成中携带活化的氨基酸 RNA的碱基组成： A、