免疫细胞化学描述.docVIP

(一) 免疫荧光法 　　【原理】 　　¨ 用于免疫荧光的标记物是小分子的荧光素，可标记抗体或抗原； 　　¨ 荧光素经某种特定波长的光照射激发后，能发射出一种比激发光波波长更长而且能量较低的荧光，籍此可作定位观察或示踪； 　　¨ 借助于荧光显微镜进行观察。 　　1、常用的荧光素 　　¨ (1) 异硫氰酸荧光素 (Fluorescein Isothiocyanate, FITC) 　　¨ (2) 四甲基异硫氰酸罗丹明 (Tetramethyl Rhodamine Isothiocyanate, TRITC) 　　¨ (3) 四乙基罗丹明 (RB200) 　　¨ (4) 碘化丙啶 (propidium iodide, PI) 　　(1) 异硫氰酸荧光素(FITC) 　　¨ 易溶于水和乙醇。 　　¨ 最大吸收光谱为490～495nm，最大发射光谱为 520～530nm．呈翠绿色荧光，分子量 389.4。 　　¨ 在碱性条件下，FITC的异硫氰酸基在水溶液中与Ig的自由氨基形成共价键，成为标记的荧光抗体。一个lgG分子上最多能标记15～20个FITC分子。 　　(2) 四甲基异硫氰酸罗丹明(TRITC) 　　¨ 最大吸收光谱550nm，最大发射光谱620nm，呈红色荧光，分子量为444。 　　¨ 与蛋白质结合的方式同FITC。 　　(3) 四乙基罗丹明(RB