生化资料之酶详解.ppt

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第五章 酶(enzyme) 酶的化学本质 绝大多数是蛋白质 不同分子形式的同工酶催化相同的化学反应 为什么会这样? 酶促反应速度的测定 张力效应和底物形变(strain and distortion) 酸碱催化(acid-base catalysis) 共价催化(covalent catalysis) 共价催化 亲电子催化 亲核催化 例如胰凝乳蛋白酶: Ser195-O-是强的亲核基团,来攻击底物的羰基碳(>C=O),迅速形成不稳定的共价中间复合物,降低反应活化能以加速反应进行。 酶促反应的动力学 测定的反应时间越长越好吗? 应该测定反应的初速度 研究影响酶促反应速度的因素 即底物的消耗量很小(一般在5﹪以内)时的反应速度 酶浓度与反应速度的关系 v [E] 当[S]足够大时,则v=k[E] 底物浓度与反应速度的关系 当底物浓度较低时 反应速度与底物浓度成正比;反应为一级反应。 [S] V Vmax 随着底物浓度的增高 反应速度不再成正比例加速;反应为混合级反应。 [S] V Vmax 当底物浓度高达一定程度 反应速度不再增加,达最大速度;反应为零级反应 [S] V Vmax (米氏方程) k2 k3 k2 k3 = 令: (米氏常数) k2 k3 k3 Et = E + ES k3 k3 米氏常数的意义 当 时: 因此,米氏常数的涵义是:当反应速度为最大反应速度一半时,底物的浓度。 Km是酶的一个特征性常数 只与酶的性质有关,与酶的浓度无关 当酶能催化几种不同的底物时,Km值一样吗? 如己糖激酶:以葡萄糖为底物时,km=0.05mmol/L 以果糖为底物时, km=1.5mmol/L 哪个是最适底物? Km除了与底物类别有关外,还与哪些因素有关? pH 温度 但与酶的浓度和底物浓度无关 所以km值是酶的一个特征性常数 如何测定米氏常数? (1)v对[S]作图 双倒数作图法(Lineweaver-Burk作图法) 米氏方程的转换 pH对酶作用的影响 pH影响反应速度的原因 ( 1 ) pH影响了酶分子、底物分子和ES复合物的 解离状态。 ( 2 ) 过高、过低的pH导致酶蛋白变性。 因为它除了受到底物的种类、温度、时间等的影响外、还受底物浓度、酶浓度等因素的影响。 例: 碱性磷酸酶催化磷酸苯酯水解时 [s]为2.5x10-5 M,最适pH为 8.3 [s]为2.5x10-2 M,最适pH为10.0 酶的最适pH不是一个固定的常数 单体酶 只有1条多肽链的酶。 寡聚酶 由几个亚基组成的酶,亚基之间以非共价键连接。 多酶络合物 几个酶嵌合而成的络合物,这些酶功能相关,催化一系列连续的反应 活性部位 (活性中心) 结合基团 催化基团 酶的结构与功能的关系 酶的活性中心(active center) (binding group) (catalytic group) Glu和Asp的-COOH 组成酶活性中心的氨基酸侧链基团主要有 Lys的ε-NH2 His的咪唑基 Ser的-OH Cys的-SH Tyr的侧链基团 Active sites may include distant residues. (A) Ribbon diagram of the enzyme lysozyme with several components of the active site shown in color. (B) A schematic representation of the primary structure of lysozyme shows that the active site is composed of residues that come from different parts of the polypeptide chain. 活性中心中的基团,在一级结构中可能相距较远 必需基团 活性中心的基团都是必需基团 活性中心以外的基团呢? 底 物 活性中心以外的必需基团 结合基团 催化基团 活性中心 胰凝乳蛋白酶 His57, Asp102, Ser195组成活性中心 Ile16, His57, Asp102, Asp194, Ser195是酶表现活性所必需的 Enzyme inhibition by diisopropylphosphofluoridate (DIPF), a group-specific reagent. DIPF can inhibit an enzyme by covalently modifying a c

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