DNA损伤与修复概念.ppt

无嘌呤位点的直接修复 DNA嘌呤插入酶能催化游离嘌呤碱基或脱氧核苷与DNA嘌呤缺失部位重新生成糖苷共价键，导致嘌呤碱基的直接插入。具有很强的专一性。 单链断裂的直接修复 DNA连接酶能够催化DNA双螺旋结构中一条链上缺口处的5?-磷酸基团与相邻片段的3?-羟基之间形成磷酸二酯键，从而直接参与部分DNA单链断裂的修复，如电离辐射所造成的切口。 二、切除修复是最普遍的DNA损伤修复方式 碱基切除修复 核苷酸切除修复 碱基切除修复（base excision repair） ① 识别水解：DNA糖基化酶特异性识别DNA链中已受损的碱基并将其水解去除，产生一个无碱基位点； ② 切除：在此位点的5?端，无碱基位点核酸内切酶将DNA链的磷酸二酯键切开，去除剩余的磷酸核糖部分； ③ 合成：DNA聚合酶在缺口处以另一条链为模板修补合成互补序列； ④ 连接：由DNA连接酶将切口重新连接，使DNA恢复正常结构 核苷酸切除修复（nucleotide excision repair） ① 首先，由一个酶系统识别DNA损伤部位； ② 其次，在损伤两侧切开DNA链，去除两个切口之间的一段受损的寡核苷酸； ③ 再次，在DNA聚合酶作用下，以另一条链为模板，合成一段新的DNA，填补缺损区； ④ 最后由连接酶连接，完成损伤修复。 E.coli的NER主要由4种蛋白质组成： UvrA UvrB UvrC UvrD 人类的DNA损伤核苷酸切除修复 ① 首先由损伤部位识别蛋白XPC和XPA等，再加上DNA复制所需的SSB，结合在损伤DNA的部位； ② XPB、XPD发挥解旋酶的活性，与上述物质共同作用在受损DNA周围形成一个凸起； ③ XPG与XPF发生构象改变，分别在凸起的3′-端和5′-端发挥核酸内切酶活性, 在增殖细胞核抗原（PCNA）的帮助下，切除并释放受损的寡核苷酸； ④ 遗留的缺损区由聚合酶δ或ε进行修补合成； ⑤ 最后，由连接酶完成连接。 NER不仅能够修复整个基因组中的损伤，而且能拯救因转录模板链损伤而暂停转录的RNA聚合酶，即参与转录偶联修复（transcription-coupled repair）。 作用方式：NER蛋白质被募集于暂停的RNA聚合酶。 转录偶联修复的意义：将修复酶集中于正在转录DNA，使该区域的损伤尽快得以修复。 着色性干皮病是一种常染色体隐性遗传性皮肤病，发病率约1：25万，特征是UV照射后DNA损伤不能修复。患者对日光高度敏感，有畏光现象。光暴露部位皮肤萎缩、大量的雀斑样色素加深斑，继而出现新生物，可有多系统累及，许多患者可伴有眼球、神经系统等病变。 碱基错配修复（ mismatch repair） 错配是指非Watson-Crick碱基配对。 碱基错配修复也可被看作是碱基切除修复的一种特殊形式，主要负责纠正： ① 复制与重组中出现的碱基配对错误； ② 因碱基损伤所致的碱基配对错误； ③ 碱基插入； ④ 碱基缺失。 E.coli错配修复系统修复复制差错 Dam甲基化酶（methylase）使E.coli处于暂时的半甲基化状态，标记母链和新合成的DNA链，帮助新合成的DNA链被错配修复系统识别并修复。 模板链的GATC序列甲基化 MutH仅切割新合成的DNA链 MutH的切口位于错配核苷酸的5?侧，使用外切酶Ⅶ或RecJ，按5??3?方向降解DNA； 切口位于错配的3’侧，则使用外切酶Ⅰ，按3?? 5?方向降解DNA。 DNA聚合酶Ⅲ填补所产生单链DNA缺口。 MSH（MutS homologs）蛋白 与MutL同源的MLH和PMS蛋白 真核细胞错配修复系统无MutH，也无半甲基化标记母链。 错配修复系统利用冈崎片段连接前的DNA缺口辨别错配碱基所在的DNA链。 真核细胞核苷酸修复错配系统： 三、DNA严重损伤时需要重组修复 同源重组修复 非同源末端连接的重组修复 同源重组修复 四、某些修复发生在跨越损伤DNA的复制事件之后 重组跨越损伤修复 合成跨越损伤修复 SOS修复中LexA-RecA操纵子的作用机制 DNA损伤和修复的意义 The significance of DNA damage and repair 第三节 一、DNA损伤具有双重效应 一是给DNA带来永久性的改变即突变，可能改变基因的编码序列或者基因的调控序列； 二是DNA的这些改变使得DNA不能用作复制和转录的模板，使细胞的功能出现障碍，重则死亡。 DNA损伤通常有两个生物学后果 二、DNA损伤修复障碍与肿瘤等多种疾病相关 DNA损伤与肿瘤、衰老以及免疫性疾病等多种疾病的发生有着密切的关联 目录 目录 生物化学与分子生物学 DNA损伤与修复 DNA Damage and Repair 第十五章 各