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玉米细菌性枯萎病 孙铭阳 玉米细菌性枯萎病 病原物为斯氏泛生菌 Pantoea stewartii（E.F.Swith） 革兰氏阴性菌，好气性短杆菌 寄主范围：甜玉米为主，马齿玉米很少感病， 适宜PH值：4.5~8.5 传播昆虫：玉米跳甲 主要分布产地 美国中部及东南部，加拿大，巴西，欧洲南部，东南亚地区。 危害症状 在叶片上产生与中脉平行的、分散的水渍状条斑，病菌能够通过茎或者直接侵染叶片而在幼苗或者较老植株上产生病斑，早期侵染可能引起苗枯，较晚侵染则阻止生长或者表现为不同程度的叶枯，具有明亮的或者红色的斑纹，有或无分散的水渍状斑点，最后全叶干枯。系统侵染的植株维管束变褐色，根或茎部呈水渍状，并分泌出粘液（黄色菌脓），出现湿腐状 。 ~ . 检疫方法： 一 伊凡诺夫培养基或魏氏培养基培养 甘油30ml 柠檬酸铁铵10g 磷酸氢二钾2 . 5g, 氯化钠15g 硫酸镁0.1g, 琼脂17g 氯化钙0.1g, 蒸馏水1000ml,PH7.0 或魏氏培养基培养 酵母膏3g，蛋白胨5g，蔗糖10g，磷酸二氢钾0.5g，硫酸镁0.25g，抗坏血酸1g，PH7.2~7.4 二黑色素培养基上培养 7d，30℃菌落中心呈黑色，边缘透明 三 血清学检疫：琼脂双扩散 将适量稀释后的抗体与等量琼脂混匀，浇注成板，凝固后，在板上打孔，孔径3mm，孔间距10mm，孔中加入抗原，每孔10μL，放置湿盒中，37℃温箱，抗原就会向孔的四周扩散，边扩散边与琼脂中的抗体结合。24h－48h后观察结果，在两者比例适当处形成白色沉淀环。沉淀环的直径与抗原的浓度成正比。如事先用不同浓度的标准抗原制成标准曲线，则从曲线中可求出标本中抗原的含量。 荧光抗体法 用荧光素标记抗体，利用抗体与特定抗原相结合的原理，在荧光显微镜下快速检测病原体的技术。 酶联免疫吸附法 四 巢式PCR 巢式PCR是一种变异的聚合酶链反应，使用两对而非一对PCR引物扩增完整的片段。第一对PCR引物扩增片段和普通PCR相似。第二对引物称为巢式引物（因为它们在第一次PCR扩增片段的内部）结合在第一次PCR产物内部，使得第二次PCR扩增片断短于第一次扩增。其好处在于，如果第一次扩增产生了错误片断，则第二次能在错误片段上进行引物配对并扩增的概率极低。 检疫灵敏，准确，迅速。可在6小时内得出建议结果，满足口岸建议和田间病害诊断。。 步骤 1 目标的DNA模板 蓝色的第一对引物结合。　　 2 使用图中红色标记 的第二套引物对第一轮 PCR扩增的产物进行 第二轮PCR扩增。 缺点：易产生污染 * *