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生物酶工程主要研究内容 2 用突变技术改变酶的结构基因，生产性能稳定、活性更高的酶，这些酶被称为突变酶 ( 遗传修饰酶 ) 。 例如：酪氨酰-tRNA合成酶的突变酶，其突变部位是 A1a5 取代了 Thr 51，从而使该酶对底物的亲和力提高了100倍。 生物酶工程主要研究内容 3 用蛋白质工程技术，设计新的酶结构基因，生产自然界从未有过的性能稳定、活性更高的新酶。 八、酶的分离纯化和活力测定 （一）酶分离纯化的一般原则 （二）酶活力测定与酶活力单位 （一）酶分离纯化的一般原则 在整个分离纯化过程中要始终保持酶的活性。 酶活性的测定应始终贯穿于整个分离纯化过程中，以便于监测酶活性的变化、掌握酶的纯化程度，选择和确定酶的分离纯化方法。 （二） 酶活力测定与酶活力单位 1.酶活力测定 酶活力（enzyme activity） ：酶催化底物发生化学反应的能力。测定酶活力，实际上就是测定酶促反应进行的速度。 酶促反应速度越快，酶活力就越大；反之，速度越慢，酶活力就越小。 酶促反应的速度曲线及其说明 　引起酶促反应速度增加或下降的原因很多，例如：底物浓度下降、产物对酶的抑制、由于产物浓度增加而加速了逆反应、酶变性等。因此，为了排除上述干扰，酶活力应该用酶促反应的初速度来表示。 底物开始反应之后，很短一段时间内的反应速度。反应时间一般采用5-10min。 只要测定方法足够灵敏准确，原则上，反应时间愈短愈好。 反应初速度 2.酶活力单位 衡量酶活力大小的计量单位。　 概念 国际生物化学协会酶学委员会对酶活力单位作了下列规定：在25℃、最适pH、饱和底物浓度的反应条件下，1min内将1微摩尔(μmol)的底物转化为产物所需要的酶量，定为一个国际单位 ( 1 IU＝1μmol／min )。 如果底物分子有一个以上可被作用的化学键，则一个酶活力单位，便是 1min 使 1μmol 有关基团转化所需要的酶量。 为了使酶活力单位与国际单位制中的反应速度（mo1/s ）相一致，1972 年国际酶学委员会正式推荐用 Kat（Katal）作为酶活力单位。 规定为：在最适条件下，每秒钟内能使 1mol 底物转化成产物所需要的酶量，定为一个Kat 单位（1Kat ＝ 1mo1／s）。Kat 与国际单位 ( IU ) 的互算关系如下： 1Kat ＝ 6×107 IU 1 IU ＝ 16.67 n Kat 酶的转换数（Kat） 酶的比活力 每毫克酶蛋白（酶制剂）所含的酶活力单位数称为酶的比活力（specific activity） ，用 IU／mg 蛋白表示。 酶的比活力是酶制剂的一个纯度指标。对同一种酶来说，比活力愈高，表明酶纯度愈高。 思考题 1. 简述酶和一般催化剂的共性与特性。 2. 酶原和酶原激活有何生物学意义？ 3. 何谓酶的活性部位？有哪些研究方法？ 4. 试述酶催化的机理？与酶高效催化相关的因 素有哪些？ 5. 试述变构调节酶与共价调节酶的异同。 6. 何谓同工酶？举例说明其研究意义。 7. 举例说明酶竞争性抑制作用及其研究意义。 * ` `` [、、、、 H 8 竞争性抑制典型的例子 丙二酸对琥珀酸脱氢酶 的抑制，因为丙二酸是二羧酸化合物，与这个酶的正常底物琥珀酸结构上很相似。 COOH CH 2 CH 2 COOH COOH CH 2 COOH 琥珀酸 丙二酸 竞争性抑制剂在临床治疗方面十分重要,不少有疗效的药物实际上就是酶的竞争性抑制剂。 例1 氨基喋呤  氨基喋呤（2-氨基-4-羟基-6-甲基蝶呤类似物）能抑制癌细胞，治疗白血病。 二氢叶酸还原酶 二氢叶酸 四氢叶酸 临床应用意义 例 2 磺胺类药物 它能抑制细菌的生长繁殖，而不伤害人和畜禽。人和畜禽能够利用食物中的叶酸，而细菌不能利用外源的叶酸，必须自己合成。 细菌体内的二氢叶酸合成酶催化对氨基苯甲酸变成二氢叶酸。磺胺类药物，由于与对氨基苯甲酸的结构非常相似，因此对二氢叶酸合成酶有竞争性抑制作用，可使合成二氢叶酸的反应受阻，细菌由于缺乏二氢叶酸，生成四氢叶酸的原料不足，便停止生长繁殖。 磺胺类药物的结构 （对氨基苯磺酰胺） 叶酸 :N-[4-[（2-氨基-4-氧代-1，4-二氢-6-蝶啶