课内生物技术(全).docVIP

1、生物技术：又称生物工程。人们以现代生命科学为基础，结合其他基础学科的科学原理。采用先进的工程技术手段，按照预先设计改造生物体或加工生物原料，为人类生产出所需产品或打到某种目的。 2、食品生物技术：通过生物手段，用生物程序生产细胞或其代谢物质来制造食品改进传统生产过程，提高人类生活质量的科学技术。 3、食品生物技术的应用： 1.利用基因工程、细胞工程技术对食品资料改造与改食 2.利用发酵技术，酶工程技术将农副产品原料加工成商品。 3.利用生物技术进行产品的二次开发，新成新产品。 4、利用酶工艺、发酵技术、生物反应器等对传统食品加工工艺进行改造降低能耗，提高产率，改善食品品质。 4、基因：遗传因子，携带遗传信息的DNA序列，其产物为各种RNA或蛋白质，是控制性状的基本遗传物质。 5、基因工程：将一种供体生物体的目的基因与事宜的载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种受体生物体内，使之按照人们意思稳定遗传并表达出新的基因产物或产生新的遗传性状的DNA体外操作程序。 6、基因工程实施要有四个必要的条件 7、限制性核酸内切酶是识别DNA的特异序列并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶 8、DNA聚合酶基因工程载体质粒载体生物学特性目的基因的获取方法基因文库基因文库构建的基本步骤cDNA文库cDNA文库建的基本步骤 ②必备条件（特性）：1、便于重组DNA分子的导入和筛选克隆子2、重组DNA分子在受体细胞被能稳定维持3、适于外源基因高效表达4、遗传性稳定5、易于扩大培养或发酵生长6、安全性高 19、目的基因导入受体细胞的方法：转化、转染、感染 20、土壤根癌农杆菌：一种革兰氏阴性细菌，能侵染大多数双子叶植物和少数单子叶植物。Ti质粒：毒性区、T-DNA区、结合转移区、复制起始区 21、Ti质粒的作用和改造 22、DNA重组子的筛选与鉴定：（看不清。随后补上） 重 组 子 的 筛 选 直接筛选 DNA 鉴定 重组子大小的鉴定（质粒DNA的快速提取鉴定） 重组子酶切图谱鉴定（限制性核酸内切酶切片段大小鉴定） DNA序列分析 同源性分析鉴定（原位杂交） 载体 筛选 质粒载体的 噬菌体包装容器的 间接筛选 翻译产物 转录方法 其他方法 23、探针：带有特殊标记的核酸片段，能够与待测的核酸片段互补结合，可用于检测核酸样品中存在的特定基因。 24、菌落印迹原位杂交的步骤： 1.将被筛选的菌落转移到硝酸纤维素滤膜上，同时保藏原来的菌落平板作为参照； 2.菌落的裂解及DNA结合于硝酸纤维素滤膜 3.膜上的DNA烤干固定后加入探针，同滤膜上的菌落所释放的变性DNA杂交； 4.用放射自显影技术进行检测 5.含有与探针互补序列的菌落DNA，就会在x光胶片上出现曝光点。 25、Southern印迹杂交的步骤 1.提取重组体总DNA 2.利用限制性酶切后进行琼脂糖凝胶电泳 3.在碱性溶液中使DNA变性 4.经毛细管虹吸作用被原位转移到硝酸纤维性膜或尼龙膜上 5.将膜上的DNA烤干固定后加入杂交液和标记探针进行杂交，洗去多余探针 6.在X光片上反射自显影 Nouthern 印迹杂交的步骤 提取重组体总RNA或mRNA 在强变性剂存在情况下进行琼脂糖凝胶电泳 将电泳分离的RNA原位吸印到经化学处理过的纸或硝酸纤维素膜上 用同位素标记的探针进行杂交 在X光片上放射自显影 Western印迹杂交的步骤 提取重组体蛋白， 用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质， 将蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶上原位转移到硝酸纤维素膜上 进行抗体与抗原结合反应 26、反义RNA：有义DNA链转录而成，与特异的靶RNA互补结合并能抑制靶RNA表达的一段序列 反义基因：转录产生反义RNA的基因 反义RNA技术：把一段DNA序列以反义方向插入到合适启动子和终止子之间，然后把此基因构建体转化到受体细胞中，通过选择培养获得转化生物体的技术。 27、反义基因的表达载体构建方法： 分离得到mRNA，并以其为模板合成反义DNA 以此反义链为模板合成有义DNA链 以细菌质粒为载体，用限制性酶切靠近启动子，产生切口 将有义DNA插入表达载体的切口中，若插入的表达载体酶切后以相反方向插入载体DNA环中，即表达载体转录形成反义RNA 28、电泳：带电的颗粒或生物分子在外加电场作用下，向带相反电荷的电极做定向移动的现象。 泳动度：带电颗粒在单位电场强度下泳的速度 29、聚合酶链式反应技术：（掌握）PCR 定义：又称基因扩增技术。在DNA聚合酶催化下，以DNA为模板，特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，在体外复制DNA的过程