培训课件--地中海贫血基因检测系统2010.ppt

广州市主要出生缺陷的发生率(1998-2001) 排序 出生缺陷 例数 发生频率 (/10000) 1 先天性心脏病 260 19.66 2 重型a地贫 208 15.73 3 多指 200 15.12 4 肢体短缩 111 8. 39 5 唇裂/腭裂 109 8.24 根据?-地贫基因缺失特点，利用多重GAP-PCR技术可同管检测三种缺失型及正常四种基因型。通过电泳条带大小来判断。 操作简便快捷，结果直观可靠。 ?-地中海贫血基因检测试剂盒 ?-地中海贫血基因诊断 可同时检测 --SEA、-?3.7、-?4.2等3种缺失型?-地中海贫血。 可检出无临床症状的静止型?-地贫（??/ -?3.7、 ?? /-?4.2）， 应用：婚前检查、产前检查及产前诊断。 ? -地中海贫血基因诊断操作流程 ? 待测样品DNA的制备 全血DNA快速提取试剂盒 应用 全血DNA的提取 培养细胞基因组DNA的提取 注意事项 抗凝剂:不能用肝素。 红细胞裂解 干燥环节：乙醇干燥须完全,有机溶剂抑制PCR扩增. PCR扩增 PCR反应液Mix-A 21μL DNA模板 4μL ( 200-500ng) Total 25μL 96℃ 15min 98℃ 45s 64℃ 1min30s 35 cycles 72℃ 3min 72℃ 5min ?-地中海贫血基因诊断试剂盒：----采用电泳结果判读 M DNA Marker 1. (?? /?? ) 1.8kb 2. (?? / -? 4.2) 1.8kb; 1.6kb 3. (?? / -? 3.7) 2.0kb; 1.8kb 4. (-? 4.2 / --SEA ) 1.6kb; 1.3kb 5. (-? 3.7 / --SEA ) 2.0kb; 1.3kb 6. (??/--SEA ) 1.8kb; 1.3kb M 1 2 3 4 5 6 M ? -珠蛋白基因型 PCR产物片段长度 -? 3.7 2.0kb ?? 1.8kb -? 4.2 1.6kb --SEA 1.3kb 注： ?-地中海贫血点突变基因检测试剂盒 同时检测 ? CS、 ? QS、 ? WS点突变 Wild type CSM WSM QSM 临床意义： 作为 ? -地中海贫血三种缺失型的补充，对怀疑? -地中海贫血有漏诊的患者进行? CS、 ? QS、 ? WS点突变的诊断，确定具体的基因突变类型 β-地中海贫血基因诊断试剂盒 可对17个突变位点 (8个常见位点及9个少见位点)进行检测 合理的探针设计明显减少了非特异性杂交反应的发生 位点设计更合理，绝大部分突变位点都有相应正常对照，结果易于判定 携带者检出 HBB gene HBB1 HBB2 HBB3 41 42 71 72 41-42M/N 654 71-72M/654M β-地中海贫血基因诊断操作流程 PCR扩增 用生物素标记的引物扩增待测样品DNA PCR-Mix-I 23μL DNA模板 2μL Total 25μL 50℃ 15min 95℃ 10min 94℃ 1 min 50℃ 30s 35 cycles 72℃ 30s 72℃ 5min 取15 mL 塑料离心管，放入膜条，加入A液5-6 mL及PCR产物。将塑料管放入沸水中加热10分钟，取出拧紧盖子， 放入42℃杂交箱杂交1.5—4小时。 ? 变性及杂交 洗 膜 取出膜条，移至装有预热B液的50 mL管中， 于42℃轻摇洗涤15分钟 ?   显 色 1）POD溶液孵育30分钟 2）洗涤 用A液室温洗两次，每次5分钟。 3）显色 将膜条浸泡于显色液中避光显色10-15分钟即可见斑点显现。 N/N 654M/N 41-42M/N 结果判读 41-42N 654N －28N 71-72N 17N βEN 31N 27/28M 41-42M 654M －28M 71-72M 17M βEM 31M IVS1-1M 43M －32M －29M －30M 14-15M CAPM IntM IVS1-5M