第五章_STR自动分型重点分析.ppt

第六章 STR自动分型 STR自动分型 特点：自动化程度高 快速、灵敏、准确、稳定 重复性好 核心：建立多基因复合扩增体系时采用3-4种荧光染料分别标记不同的STR基因座引物，同一种荧光染料标记的STR基因座扩增产物大小不重复。复合扩增产物的片段分离识别及各个等位基因命名由自动化设备完成。 荧光标记STR复合扩增 实质：采用四、五种荧光染料，其中一种用于染料与复合扩增产物混合后同步电泳的分子量内标DNA片段，余下的3或4种染料颜色标记STR基因座。 荧光染料标记在引物的5′端，扩增后使相应PCR产物的一条链均携带标记引物的荧光染料。使扩增产物在检测设备上易识别。 注意事项: 同一荧光标记的不同STR的等位基因片段范围不能重叠，前一个STR最大的等位基因与后一个STR最小的等位基因相距最少10bp。 在一个荧光复合扩增体系中，组合荧光染料的发射波长相差越大越好。 荧光标记的分析方法 荧光法：亦称荧光PCR技术（fluoresence??PCR, F-PCR），是1995年由美国PE公司首先研制成功。 在荧光染料与引物保持完整时，荧光报告基团的荧光被荧光抑制基团淬灭，而在荧光染料与引物分离后，荧光报告基团才发出报告荧光，且荧光的强度与PCR产物的数量呈正比。荧光检测仪器透过PCR管壁能直接检测到荧光信号的波长和长度变化。