0914;李卓—孫小俊;李卫忠;检验结核分枝杆菌及结果分析.docVIP

检验结核分枝杆菌及结果分析【摘要】目的 对结核分枝杆菌进行检验，并对检验结果进行分析。方法 挑选疾病预防控制中心的肺结核痰液标本60例，60例痰液标本均来自本市医院在2014年1月~2015年6月期间收治的肺结核患者，同时选取同一时间段的非肺结核肺部疾病患者60例痰液标本，将120例痰液标本涂片，进行抗酸染色镜检，采用罗氏培养法对结核杆菌进行培养，在痰液接受碱前处理后，在半个小时内完成接种，并进行荧光定量PCR试验。结果 60例肺结核患者经荧光定量PCR检验的阳性率为58.33%（35/60），明显高于涂片法的阳性率23.33%（14/60）及培养法的阳性率30.00%（18/60），差异存在统计学意义（即P0.05）。60例非肺结核患者三种检验均无阳性患者。结论 荧光定量PCR检验结核分枝杆菌具有很大的优势，其阳性率明显高于涂片法和培养法。【关键词】结核分枝杆菌；涂片法；培养法；荧光定量PCR；分析 肺结核是由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，会侵及许多脏器，其中最为常见的为肺部结核感染【1】。人体在感染结核杆菌后不一定发病，当抵抗力降低或者细胞介导的变态反应增高时，才可能引起临床发病。如果结核杆菌携带者能及时诊断并接受合理的治疗，大部分可痊愈【2】。所以临床诊断肺结核的准确性对肺结核患者的预后有很大的影响。笔者就对结核分枝杆菌进行检验，并对检验结果进行分析，内容如下。资料与方法 1.1一般资料 挑选疾病预防控制中心的肺结核痰液标本60例，60例痰液标本均来自本市医院在2014年1月~2015年6月期间收治的肺结核患者，且患者均经影像学检查确诊为肺结核。同时选取同一时间段的非肺结核肺部疾病患者60例痰液标本，其中32例来自肺炎患者，18例来自支气管扩张患者，10例来自肺癌患者。 1.2检验方法 1.2.1涂片法：将120例痰液标本直接涂片，进行抗酸染色镜检。 1.2.2培养法：采用罗氏培养法对结核杆菌进行培养，在痰液接受碱前处理后，在半个小时内完成接种。 1.2.3荧光定量PCR：根据患者痰液的不同性状，将4倍体积的氢氧化钠溶液，浓度为40g/L，将痰液液化半个小时，然后去1ml痰液进行离心5分钟，转速为4000r/min，倾出上清液，用生理盐水对沉淀物进行清洗，洗涤两次，然后在沉淀物中加入DNA提取液50ml，在100摄氏度的温度状态下水浴10min，进行裂解，然后将2ml取出作为PCR的模板，放置于93摄氏度的状态下2min，进行预变性，然后93摄氏度30秒，55摄氏度1min，循环40次，进行结果判定。当结果大于1.0×103拷贝时，可判定结果为阳性。 1.3评价指标 记录三种检验方式肺结核患者痰液标本及非肺结核患者痰液标本的阳性率，进行比较。 1.4统计学方法 运用统计学软件包SPSS16.0分析处理本次研究中的所有数据，用百分比表示患者阳性率等计数资料，用卡方检验组间比较，P小于0.05代表差异存在统计学意义。结果表1 三种检验方法的检测结果检验方法例数阳性例数阳性率涂片法601423.33培养法601830.00荧光定量PCR603558.33%P值-0.050.05 从上表看出，60例肺结核患者经荧光定量PCR检验的阳性率为58.33%（35/60），明显高于涂片法的阳性率23.33%（14/60）及培养法的阳性率30.00%（18/60），差异存在统计学意义（即P0.05）。60例非肺结核患者三种检验均无阳性患者。表2 三种检验结果的相关性检验方法例数荧光定量PCR+相符率涂+培+88100%涂-培+1010100%涂+培-6583.33%涂-培-361233.33%总计603558.33% 从上表可看出，涂片检验及培养检验均为阳性的痰液标本与荧光定量PCR的相符率为100%，涂片检验为阴性但培养检验为阳性的痰液标本与荧光定量PCR的相符率为100%，涂片检验为阳性，培养检验为阴性的痰液标本与荧光定量PCR的相符率为83.33%，涂片检验及培养检验均为阴性的痰液标本与荧光定量PCR的相符率为33.33%。讨论 肺结核患者主要有低热、盗汗、乏力、消瘦、纳差、咳嗽、咯血、胸痛等临床症状，严重影响患者的生活质量。临床一般对患者的痰液进行检验，以区分鉴别其他肺部疾病【3】。早期临床一般采用涂片、集菌的方法，进行抗酸染色检出阳性玢病菌，也可进行结核菌的培养、动物接种，但所需要的时间较长。 临床发现，直接涂片进行抗酸染色检验的敏感性，仅为30%左右，阳性率较低，检验结果可靠性差，涂片法只对抗酸杆菌菌体的敏感性较强，但对于死菌还是活菌比较难鉴别。而罗氏培养法，需要的时间长，一般为8至12周，且需要活菌才能生长，与现代的快速检验不符，但罗氏培养法依然可以做菌