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茎瘤芥黑斑病菌rDNA ITS区序列分析 　　摘要：以茎瘤芥（Brassica juncea Coss. var. tumida Tsen et Lee）黑斑病病株为试材，对黑斑病菌5.8 S rDNA及其侧翼ITS区序列进行克隆、测序和比对分析。结果表明，5个供试病菌碱基序列同芸薹链格孢的碱基序列相似度达到99.68%，不存在大于3 bp的碱基差异；而与甘蓝链格孢和萝卜链格孢的碱基差异较明显，均存在大于3 bp的碱基差异，且存在大量的缺失片段。初步确定引起茎瘤芥黑斑病的病原菌为芸薹链格孢。 　　关键词：茎瘤芥（Brassica juncea Coss. var. tumida Tsen et Lee）；黑斑病；ITS；芸薹链格孢 　　中图分类号：S436.3 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）20-5044-03 　　Sequence Analysis of ITS Region of rDNA of Brassica juncea Coss. var. tumida Tsen et Lee Black Spot Disease 　　LIU Hong-fang，CHEN Fa-bo，YANG Yong-qiang 　　（Life Science and Technology Institute， Yangtze Normal University， Chongqing 408100，China） 　　Abstract：Taking Brassica juncea Coss. var. tumida Tsen et Lee black spot disease as materials， 5.8 S rDNA and its flanking ITS were cloned， sequenced and aligned. The results showed that the sequence of 5 pathogen were almost identical with that of Alternaria brassicae. Similarity degree reached 99.68%. There was no differences more than 3 bp base. There were obvious differences between the sequence of A. brassicicola and A. japonica， more than 3 bp different base and a lot of deletions. It was prelimiarily dertermined that the pathogen caused the black spot disease on Brassica juncea Coss. var. tumida Tsen et Lee was Alternaria brassicae. 　　Key words： Brassica juncea Coss. var. tumida Tsen et Lee； black spot disease； ITS； Alternaria brassicae 　　茎瘤芥（Brassica juncea Coss. var. tumida Tsen et Lee）是我国特有的作物资源，榨菜是利用其瘤茎为原料，经过专门的加工腌制而成的一种腌菜食品。在我国以“涪陵榨菜”最为著名，与欧洲酸菜、日本酱菜并称世界三大名腌菜[1]。榨菜是重庆三峡库区重要的农业支柱产业之一，是当地农业生产的主要经济来源。黑斑病是茎瘤芥的主要病害之一，发生普遍，主要发生在茎瘤芥的茎和叶片上，此病发生后蔓延迅速，可导致茎瘤芥叶片枯死，植株早衰，甚至腐烂，严重影响茎瘤芥的产量和品质。 　　研究表明，引起十字花科蔬菜黑斑病的病原菌包括芸薹链格孢（Alternaria brassicae）、甘蓝链格孢（A. brassicicola）和萝卜链格孢（A. japonica）[2]。链格孢属内不同种之间培养性状不稳定，且高度相似和重叠，在实际操作中用传统方法很难鉴定到种的水平[3]。Jasalavich等[4]对十字花科蔬菜上的链格孢属真菌核糖体DNA序列进行分析比较，认为可以基于其进行分类鉴定。目前，关于茎瘤芥黑斑病的研究鲜见报道。本试验以我国茎瘤芥主产区涪陵5个不同种植区的茎瘤芥黑斑病病株为试材，通过对茎瘤芥黑斑病菌rDNA ITS序列进行分析，探索基于该区进行茎瘤芥黑斑病菌种水平上分类鉴定的可靠性，以期为该病的进一步研究提供理论依据。 　　1 材料和方法 　　1.1 供试材料 　　供试材料于2011