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老芒麦花粉活力和柱头可授性及授粉方式研究 　　摘要：用TTC法测定了老芒麦（Elymus sibiricus L.）花粉的活力，用联苯胺-过氧化氢法测定了其柱头的可授性；采用套袋方法，进行自花、异花授粉及开放授粉方式下单穗结实率统计，探讨老芒麦的授粉方式。结果表明，盛花期后相应天数的花粉活力是早熟老芒麦中熟老芒麦晚熟老芒麦；花粉活力从最高到无，早熟老芒麦可持续6 d，中熟老芒麦和晚熟老芒麦可持续5 d。3种熟性的老芒麦在盛花期开始后的前2 d柱头可授性强；早熟老芒麦和中熟老芒麦的柱头从盛花期第一天开始直至第10天均有可授性，晚熟老芒麦的柱头从盛花期第一天开始至第八天均有可授性，因此老芒麦的最佳授粉期在盛花期第一至二天。老芒麦为自花授粉植物，具有一定的天然杂交率。 　　关键词：老芒麦（Elymus sibiricus L.）；花粉活力；柱头可授性；授粉方式 　　中图分类号：S543+.9 文献标识码： A 文章编号：0439-8114（2013）18-4469-04 　　老芒麦（Elymus sibiricus L.）是禾本科（Gramineae）小麦族（Triticeae）披碱草属（Elymus L.）多年生疏丛型中旱生牧草，为披碱草属模式种，是分布于北半球寒温带的一种比较古老的野生草种，富含蛋白质，是牛、马、羊均喜食的优等饲用禾草，具有适应性强、易栽培等优良特性，是中国北方地区优良的多年生栽培牧草，具有叶量大、品质好等优点，被广泛用于人工草地建植和天然草地改良[1，2]。目前，在老芒麦的引种育种、栽培利用、抗性、基因组组成和进化关系、种间杂交、遗传多样性等方面研究较多[3-12]，而对老芒麦有性生殖过程的研究甚少。在植物有性繁殖过程中，两性之间的传粉是基础，传粉过程始于花药开裂和成熟花粉的散出，携带着雄配子或其前体的花粉粒，必须在具有活力时到达适宜的接受柱头才能保证受精过程的顺利进行。植物受精成败受花粉活力、柱头生活力和环境温度、湿度等影响。近年来，对花粉活力与寿命及柱头可授性的研究已经引起了不少学者的重视，开展了大量研究工作[13]，对老芒麦花粉活力、柱头可授性的研究目前尚未见报道，关于老芒麦的授粉方式至今也未有定论。盘朝邦[14]记载老芒麦为异花授粉植物，闵继淳[15]也指出老芒麦是异花授粉植物；徐柱[16]记载老芒麦为自花授粉植物；而Hamrick等[17]曾对涉及165个属449个种的不同类型植物的遗传变异水平和居群分化程度进行统计，结果发现自花授粉植物51%的变异存在于居群间，异交风媒植物绝大部分（90.1%）的遗传变异存在于居群内，只有9.9%存在于居群间，鄢家俊等[18]对川西北高原野生老芒麦居群穗部形态多样性研究表明居群间变异系数为30.69%，从这个结论来看老芒麦既不属于严格意义上的自花授粉植物也不属于异花授粉植物。本试验以3个不同熟性老芒麦为材料，对其花粉活力、柱头可授性及授粉方式进行研究，旨在探索老芒麦的遗传规律，为揭示老芒麦的生殖特性以及为其杂交育种、丰产栽培提供科学依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 供试材料 　　试验用老芒麦为种植第四年的老芒麦，按照《老芒麦种质资源描述规范和数据标准》[19]的规定，老芒麦的熟性可分为早熟（115 d）3种类型。试验材料为早熟、中熟和晚熟老芒麦。 　　1.2 方法 　　1.2.1 花粉活力测定 盛花期第一天取花序中部小穗的第一、二朵小花，选取颖片展开后露出的尚未开裂花药，用消毒镊子取花药放于有干滤纸的培养皿中，于常温（23 ℃左右）下保存，每个类型的不同开花日期的花粉放在不同的载玻片上，并标记好类型及开花日期，重复3次。盛花期第一天取下花药后立即测其活力，花后第二天起每天上午9：00～10：00取花粉用TTC法测定其活力，连续测定直至花粉活力丧失。 　　TTC法步骤：用干净镊子取一个花药置于载玻片上，加1滴0.5% TTC溶液用镊子将其充分捣碎，迅速盖上盖玻片，将载玻片置入内有湿滤纸的培养皿中，连同培养皿放置在37 ℃黑暗条件下，20～30 min后置Motic BA200 显微镜下观察，统计盖片中央5 个不重叠视野中红色花粉所占比例（经TTC法检测后，有活力的花粉粒被染成红色，无活力的花粉粒仍为其自身的颜色），10个重复，求其平均值。计算公式为：花粉活力=变红色的花粉数目/花粉总数目×100%。 　　1.2.2 联苯胺-过氧化氢法检测柱头可授性 盛花期第一天开始，每天标记同时开放花序中部小穗的第一、二朵小花，剪取开花后不同天数花序中部小穗的第一、二朵小花，将其柱头浸入凹载玻片中含反应液（1%联苯胺∶3%过氧化氢∶水=4∶11∶22，体积比）的凹面处，若柱头具有可授性（呈现出过氧化氢酶活性），则柱头周围的反应液呈现蓝色并有大量气泡出现。染色