培训课件_药品微生物检验基础知识.ppt

三、菌种 注意： 标准储备菌株、工作菌株都应进行纯度和特性确认 工作菌株的传代次数不得超过5代（从菌种收藏机构获得的标准菌株为第0代） “1代”是指将活的培养物接种到微生物生长的新鲜培养基中培养。 实验室必须建立和保存其所有菌种的进出、收集、贮藏、保存、确认试验及销毁的记录。 三、菌种 标准菌株： ①冻干粉（图P63） ②甘油冻存管（图P64） 三、菌种 菌种保藏机构： CMCC 中国医学微生物菌种保藏管理中心 GIMCC 广东省微生物研究所微生物菌种保藏中心 ATCC 美国典型菌种保藏中心 例： CMCC （B） 26003 菌种保藏机构 细菌 菌种编号（金黄葡萄球菌） 三、菌种 2、菌种的鉴定 金黄色葡萄菌 CMCC (B) 26003 甘露醇平板上划线分纯，典型菌落 为黄色圆形突起，表面湿润光滑； 革兰氏染色：阳性，球菌。 血浆凝固霉酶实验：阳性 三、菌种 2、菌种的鉴定 大肠埃希菌 CMCC (B) 44102 大肠埃希菌在麦康凯培养基上的菌落形态特征：鲜桃红色或微红色,菌落中心呈深桃红色,圆形,扁平,边缘整齐,表面光滑,湿润 革兰氏染色：阴性，杆菌。 大肠埃希菌(Escherichia coli) 供试液制备和增菌培养 取供试品，照“非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法” （通则1105）制成1：10 供试液。取相当于1g 或1mL 供试品的供试液，接种至适宜体积（经方法适用性试验确定的）的胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，30～35℃培养18～24 小时。 大肠埃希菌(Escherichia coli) 选择和分离培养?取上述预培养物1mL 接种至100mL 麦康凯液体培养基中，42～44℃培养24～48 小时。取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～72 小时。 大肠埃希菌(Escherichia coli) 结果判断?若麦康凯琼脂培养基平板上有菌落生长，应进行分离、纯化及适宜的鉴定试验, 确证是否为大肠埃希菌；若麦康凯琼脂培养基平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，判供试品未检出大肠埃希菌。 三、菌种 铜绿假单胞菌 CMCC (B) 10104 溴化十六烷基三甲铵琼脂平板上划线分纯，典型菌落呈扁平，无定形、周边扩散，表面湿——灰白色，周围有蓝绿色素扩散。 氧化酶实验：阳性 绿脓菌素：阳性 革兰氏染色：阴性，杆菌； 三、菌种 白色念珠菌 CMCC (B) 98001 沙氏葡萄糖琼脂平板上划线分纯，典型菌落乳白色，表面光滑有浓酵母气味。 革兰氏染色：阳性，菌体大，球菌。 芽管试验：阳性 三、菌种 3、菌种的保藏 A：甘油冷冻管保藏法 保藏温度：－30℃～80℃； 保藏菌种有效期：1～2年 优点：保存期较长，反复传代导致菌种变异的风险较小； 缺点：操作相对复杂，成本较高。 B：斜面低温保藏法 保藏温度4℃左右，保藏时间1～3个月，但铜绿假单胞菌不宜用本法保存。 优点：操作简便，成本低，比较容易掌握； 缺点：保存期比较短，反复传代有引起变异的可能。。 ? 保藏温度 保藏 有效期 优点 缺点 甘油冷冻管 保藏法 -30℃～80℃ 1～2年 ·保存期较长， ·反复传代导致菌种变异的风险较小 ·操作相对复杂， ·成本较高 斜面低温 保藏法 4℃左右 1～3个月 ·操作简便， ·成本低， ·比较容易掌握 ·保存期比较短， ·反复传代有引 起变异的可能； ·铜绿假单胞菌不宜用本法保存。 甘油冷冻管保存菌种 甘油冷冻管保存菌种 甘油冷冻柜保存菌种 三、菌种 4、菌种的使用和销毁 过期菌种应及时销毁，销毁时应经121℃30分钟的生物灭活处理。 121℃45min高温蒸汽灭活。并进行菌种销毁记录。 四、微生物限度检查法 1、定义 微生物限度检查法—系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。 2、检查项目 定量检查—细菌数、霉菌及酵母菌数 定性检查—控制菌（金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念球菌） 检验环境：与无菌检查相同 四、微生物限度检查法 3、检验量 指一次检验用量；10g或10ml，膜剂为100cm2，贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。 4、供试液的制备 根据供试品的理化特性与生物特性，采取适宜的方法制备供试液； 供试液制备若需加温时，应均匀加热，且温度不超过45℃。 四、微生物限度检查法 制备原则： 简便、快速！ 供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。 四、微生物限度检查法 供试品分类 液体供试品 固体、半固体或黏稠性供试品 需用特殊供试液制备方法的供试品 非水溶性供试品 膜剂供试品 肠溶及结肠制剂供试品 气雾剂、喷雾剂供试品 贴膏剂供试