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PAGE PAGE 6 专题2 微生物的培养与应用 【知识梳理】 （一）培养基 1、培养基的类型及其应用 2、琼脂是从红藻中提取的 ，在配制培养基中用作为 。 3、不管哪种培养基，一般都含有 等营养物质，另外还需要满足微生物生长对 物质，例如：生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物，如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及 等的要求。 4、牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供 、 和 等营养物质。 5、培养乳酸杆菌时需要添加 ，培养霉菌时需要将培养基pH调节为 ，培养细菌时需要将pH调节为 。 6、碳源：如CO2、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供 。 氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。含有C、H、O、N的化合物既可以作为碳源，又可以作为 ，如氨基酸、牛肉膏、蛋白胨等。 （二）无菌技术 1、获得纯净培养物的关键是 。 2、无菌技术包括： （1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行 ； （2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行 ； （3）为避免周围微生物污染，实验操作应在 旁进行； （4）避免已灭菌处理的材料用具与 相接触。 3、比较消毒和灭菌（填表） 比较项 比较项 理化因素的作用强度 消灭微生物的数量 芽孢和孢子能否被消灭 消毒 较为温和 灭菌 强烈 4、消毒方法： （1）日常生活经常用到的是 消毒法，100℃ （2）对一些不耐高温的液体，则使用 消毒法，70-75 ℃下煮30min或 80 （3）对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒 等溶液以增强消毒效果，然后使用 进行物理消毒。 （4）实验操作者的双手使用75% HYPERLINK /Subject/shengwu.html 进行消毒； （5）饮水水源用 进行消毒。 5、灭菌方法： （1）接种环、接种针、试管口等使用 灭菌法； （2）玻璃器皿、金属用具等使用 灭菌法，160-170 ℃下加热1-2h，所用器械是 （3）培养基、无菌水等使用 灭菌法，100kPa、121 ℃下维持15-30min，所用器械是 （4）表面灭菌和空气灭菌等使用 灭菌法，所用器械是 。 （5）对接种环灭菌时要用酒精灯的 层火焰灼烧。 （6）最常用的灭菌方法是 ，它可以杀灭 生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。 （三）实验操作 1、配置牛肉膏和蛋白胨培养基 ①计算——称量——溶化——调pH——灭菌——倒平板 ②配制斜面培养基中，试管要加塞棉塞的目的是 。 ③试管培养基形成斜面的作用是 。 2、纯化大肠杆菌 ①接种方法有： 和 。 ②平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表 面 的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就 是 。 问题1：第一步灼烧接种环的目的： 。 问题2：每次划线前灼烧接种环的目的： 。 问题3：划线结束后灼烧接种环的目的： 。 ③稀释涂布平板法：将菌液进行一系列 ，并将不同稀释度菌液分别 到琼脂固体培养基上进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的标准菌落。 二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 尿素可以为农作物提供 肥，但是只有被 分解成 之后，才能被植物吸收利用。