分子诊断的临床应用-上海交通大学医学院检验系_PPT课件.pptVIP

分子诊断的临床应用 上海交通大学医学院检验系 樊绮诗 1953年Watson 和Crick 提出脱氧核糖核酸的双螺旋结构模型。 1990年人类基因组计划正式启动。 2001年2月科学家宣布完成人类基因组的全部序列图。 一、基因检测在感染性疾病中的应用 SARS相关冠状病毒的分子诊断 2003年4月，香港研究者Peiris等报告了50 例严重型急性呼吸道综合征(serious acute respiratory syndrome, SARS) 病人的临床表现和病毒学研究结果。 一种新的冠状病毒 (Coronavirus) 是SARS的致病原因。 (Lancet, 2003, 361: 9365) 2003年4月，德国汉堡Bernhard-Nocht热带医 学研究所学者Drosten等用随机扩增技术，获 得一段长度为300bp的核苷酸序列。 根据这段序列，建立了检测新冠状病毒的逆转录-巢式PCR和实时定量PCR技术。 （ on April 10, 2003） 检测标本 痰液、咽拭子、鼻拭子、支气管肺泡灌洗液 、 血浆、粪便。 检测方法 1. 逆转录-巢式PCR (Reverse-Nested PCR) 2. 逆转录-实时PCR (Reverse-Real time PCR) 有报道显示，在可能SARS病人中病毒的检出 率为100%。 在疑似SARS病人中的检出率为23%。 所有健康接触者中未检测到病毒。 另一项研究显示 检测病毒的3种方法（血清学检测、病 毒分离、PCR技术）中，PCR技术的检出率 最高。 讨 论 PCR技术在疾病的早期即可获得阳性结果(早于血清转换期）。 SARS患者中的阳性率约为80%， 提示(当时的)PCR方法有较高的特异性但灵敏度较差，阴性结果不能排除病毒感染。 对照中的阴性率约为98%~100%。 讨 论 痰液中病毒RNA浓度极高，说明病毒从呼吸道排放是主要传播途径。 血清中检测到极低浓度的病毒RNA，提示病毒复制不仅发生于呼吸道。 病人恢复晚期的粪便中存在病毒RNA，说明粪便可能也是一种传播途径。 鼻、咽拭子中含有的病毒RNA显著少于痰液，提示不适合作为标本（有可能漏检）。 SARS相关冠状病毒基因检测必须注意的问题 必须在规范的基因扩增实验室中进行。 应采取必要的质控规程，包括阳性对照和阴性对照。 阳性结果时必须对原始样本重复检验： 或者扩增另一个基因片段 或在另一个实验室对同一样本进行检测。 HPV基因的检测 在预防宫颈癌中的作用 宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，发病率在女性恶性肿瘤中居第二位，每年约有50万左右新发病例。 我国每年有新发病例约13.15万，占世界宫颈癌新发病例总数的26%。 持续的人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV) 感染是引起宫颈癌和癌前病变的必要因素，93.0%-99.7%的宫颈癌组织中均可检测到HPV DNA。 高危型HPV-16和HPV-18分别占宫颈癌的 50%和14%。高危型HPV的持续感染可使患 宫颈癌的风险增加250倍。 HPV DNA的检测方法 实时定量PCR (Real time PCR) 核酸扩增技术 核酸杂交捕获（Hybrid CaptureⅡ，HCⅡ）核酸杂交+信号放大技术 HC Ⅱ可一次检测所有致癌的13种高危型HPV。 敏感度：对CIN Ⅱ、Ⅲ和癌的检出率为 98%。 阴性预期值：对高度鳞状上皮细胞病变或更高度 病变的阴性预期值99.9% 细胞学检查结果为意义不明确的非典型细胞时，HPV基因的检测能预测受检者患宫颈癌的风险。 细胞学检查+HPV基因的检测是宫颈癌前病变和宫颈癌筛查的最佳方法，成为预防宫颈癌的关键。 基因检测在监测移植物排斥中的作用 关于多瘤病毒 人类多瘤病毒中常见的3种病毒：BK、JC、SV40。 BK病毒于1971年首次从肾脏移植受体的尿液中分离出。病毒主要在宿主的细胞核内进行复制。 在美国，10岁以上的正常人群中60%～80%有BK病毒感染史。 感染的病毒多潜伏于肾小管上皮细胞和尿道上皮细胞中。 BK病毒的重新激活大部分是由于免疫机制缺陷或大量使用免疫抑制剂后。 肾脏移植术后大量使用免疫抑制剂，使BK病毒重新激活，大量复制。 BK病毒复制进一步发展，成为BK病毒感染的肾间质性肾病（BKVAN）。 BKVAN患者中60%~70%会发生远期的肾脏移植失败。 BK病毒感染已经成为肾脏移植远期失败的重要原因之一。