环境中的农药残留及其分析检测【培训课件】.ppt

1.2 生物发光法 在有关生命体系中，利用发光细菌对农残进行检测。发光细菌在正常的生活状态下，体内的荧光素在有氧参与时，经荧光酶的作用会产生荧光。当受到外界因素的影响，如受化合物的毒性作用时，发光减弱，减弱程度与毒物浓度呈线性相关关系。 目前建立了一种用发光细菌快速检测蔬菜中有机磷农药残留的方法，分析发光菌对蔬菜中六种有机磷农药的响应情况，探讨了检测空心菜中甲胺磷农药残留的最佳参数，并在随后引入了流动注射分析体系，以明亮发光杆菌作为污染物毒性检测的指示生物，探讨了有机磷农药、酸、碱、酚等污染物对发光细菌的毒性作用，研究了相关参数对农药降解的影响。发光检测方法稳定、快速、简便、重现性较好，但发光细菌的获得存在一定的困难，使其应用受到了限制 2 酶抑制快速检测法 酶抑制法“快速检测”农药残留依据的是：有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制昆虫的中枢和周围神经系统中Ach-E 的活性，造成神经传导介质乙酰胆碱酯酶的积累，影响正常传导，使昆虫中毒致死，正常情况下，酶催化乙酰胆碱水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，如果样品中农药残留量较高时，酶的活性将被抑制，基质就不被水解，当加入显色剂时就不显色或颜色变化很小。目前基于酶抑制法的原理检测农药残留的主要技术有酶片、酶膜生物传感器、试剂盒快速以及检测仪等。美国1958 年就已研制出称之为酶片的商品来检测有机磷农药，灵敏度为0.1～10μg/mL。 酶抑制法最大的优点是操作简便、速度快和不需要昂贵的仪器，特别适合现场检测以及大批样品的筛选检测，易于推广普及。但是灵敏度偏低，重复性、回收率还有待提高。可用于控制含较高农药残毒的蔬菜上市，但酶抑制法的显色体系不稳定，随反应时间长短而有所差异，且检测限高，容易漏检，不能定性和定量，酶活性也易受外界干扰而影响检测结果。 3 免疫分析快速检测法 免疫分析法是一种以抗体作为生物化学检测器对化合物、酶或蛋白质等物质进行定性和定量分析的分析技术，免疫分析方法很多，能用于农残快速检测的主要有：荧光免疫测定技术、放射免疫测定技术以及酶免疫测定技术等。 酶联免疫分析法的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记，根据酶反应底物显色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫分析的结果，使测定具有极高的灵敏度，在应用中一般采用商品化的试剂盒进行测定，其特点是将抗原或抗体制成固相试剂，在与标本中抗原或抗体反应后，只需经过固相的洗涤，就可以达到抗原抗体复合物与其它物质的分离，简化了操作步骤。 酶联免疫技术的样品前处理简单，纯化步骤少，大样本分析时间短，既适合于实验室检测，又可用于现场筛选，具有分析速度快、经济、简便的特点，但抗体制备不易，而且不能完成多种农药同时检测，限制了该技术的应用。 农药残留单克隆抗体免疫分析法 农药残留单克隆抗体免疫分析法是将单克隆技术引入酶免疫分析中建立起来的方法，其实质还是利用抗体与抗原的特异性反应来检测农残含量，方法的核心是利用单克隆技术制备高特异性的抗体。 González-Martínez 等设计了可以测定有机氯农药毒死蜱的代谢产物的基于单克隆抗体技术的免疫传感器自动分析系统(图1)，对样品的检出限可以达到1μg/L 级别以下；Antonio等利用单克隆酶免疫分析技术测定了黄瓜和草莓中的西维因等三种氨基甲酸酯类农药，并与传统的HPLC 技术进行了比较，相同条件下回收率较后者高，而且省去了样品净化步骤，省时省力。 单克隆抗体免疫分析有其独特的优势，杂交瘤技术的应用可以得到大量性质均一具有高特异性的单克隆抗体McAb，不易产生交叉反应，使检测具有较高的特异性，且不易被无关的抗体干扰，有较高的灵敏度。McAb 可以用于制备免疫分析试剂盒，可以使操作简便、快速；但其不足也是显而易见的，有些农药小分子不能制备出McAb，另外，从制备人工抗原到纯化获得McAb 周期长，操作也不够简单。 4 传感器快速检测法 生物传感器是由一种生物敏感膜和电化学转换器两部分紧密配合、对特定种类的化学物质或生物活性物质具有选择性和可逆响应的分析装置，其特点是集生物化学、生物工程、电化学、材料科学和微型制造技术于一体，是一个典型的多学科交叉产物。 按其生物功能，可分为电位型和电流型酶传感器、免疫传感器、微生物传感器等。与传统技术相比，该技术更合适对环境中有害物质的快速检测。生物传感器技术具有微型化、响应速度快、样品用量少并可以插入生物组织或细胞内的特点，可实现超微量在线快速跟踪分析，在农药残留分析上得到了广泛的应用，不足之处是酶类传感器受环境特别是温度影响大，且寿命短，不易保存，准确性和重复性比较差，检测种类也比较单调。 除生物传感器外，近年来黄行九等利用化学传感器——二氧化锡气体传感器实现了对乐果、敌百虫、甲胺磷等多种农药残留的动