非发酵菌鉴定及药敏分析测试板标准操作规程SSY-LAB-SOP-WSW-104.docxVIP

标题：非发酵菌鉴定及药敏分析测试板标准操作规程文件编号：SSY-LAB-SOP-WSW-104版本号：A修订号：0发布日期：2016年9月28日生效日期：2016年10月1日部门：检验科微生物室页码：第1页，共3页1 目的规范非发酵菌鉴定及药敏分析测试板标准操作规程。2 原理系统测试板由生化反应孔和抗菌药物MIC测定试验孔组成，在生化反应孔中加入细菌悬液，抗菌药物MIC测定试验孔中加入细菌药敏培养基，经35—37℃孵育，生化反应在细菌代谢作用下直接产生颜色变化或经加入辅助试剂后产生颜色变化，抗菌药物MIC测定是根据试验孔是否出现浑浊（沉淀）确定是否有细菌生长。3 试剂盒组成3.1微生物（非发酵菌）鉴定及药敏分析系统测试板（珠海美华）3.2稀释液3.3M-H肉汤培养基4 质控铜绿假单胞菌ATCC 27853。GLUH2SODCADHLDCCUREESCGELNITINDMTEA1-A12V--+-+--GLUMANSACLACMNEMALFRUXYLCITMLTONPGACEB1-B12V---+--5 操作步骤5.1生化试验操作方法5.1.1菌悬液制备：挑取纯培养单个菌落于稀释液瓶内壁研磨，呈细菌悬液（0.5麦氏单位）。5.1.2使用移液器（配无菌吸头）吸取该菌液加入测试板A1-A12孔，B1-B12孔，每孔100ul。5.1.3在A1-A7孔分别滴加无菌石蜡油2滴。5.2药敏试验操作方法5.2.1吸取菌悬液50ul，加至M-H肉汤培养基内混匀，继续加入测试板的其余各孔（所有的药敏孔及生长对照孔C+及6.5%NaCL），每孔100ul。5.2.2撕开不干胶的纸（对齐孔）贴于鉴定板（把鉴定板两侧的凹槽页贴上），孵育18-24h标题：非发酵菌鉴定及药敏分析测试板标准操作规程文件编号：SSY-LAB-SOP-WSW-104版本号：A修订号：0发布日期：2016年9月28日生效日期：2016年10月1日部门：检验科微生物室页码：第2页，共3页后，判读结果。6 结果判断:先于A11孔（IND）滴加靛基质试剂两滴，数分钟后，再于A10孔（NIT）滴加硝酸盐还原试剂A、B各一滴，立即判读结果。A试验名称阳性阴性B试验名称阳性阴性1GLU1GLU2H2S2MAN3ODC3SAC4ADH4LAC5LDC5MNE6C6MAL7URE7FRU8ESC8XYL9GEL9CIT10NIT10MLT11IND11ONPG12MTE12ACE7 注意事项7.1所有的操作过程应避免杂菌污染。7.2霍乱弧菌必须立即用诊断血清作玻片凝集试验，并在规定的试剂内迅速报告。7.3必须事先做好板外的鉴别试验，即革兰氏染色镜检和氧化酶试验（必要时还要观察动力），若未做或做得不准确，板上的鉴别结果将可能出现根本性的错误。7.4被测菌必须是新鲜纯培养物，严格避免用两种或两种以上的菌落或用陈旧的培养物进行试验。7.5孵育48小时以后的反应结果不能作为判断的依据。标题：非发酵菌鉴定及药敏分析测试板标准操作规程文件编号：SSY-LAB-SOP-WSW-104版本号：A修订号：0发布日期：2016年9月28日生效日期：2016年10月1日部门：检验科微生物室页码：第3页，共3页7.6本测试板各孔底物在无菌条件下冷冻干燥，密封包装，临用时先置室温预温再在无菌环境下打开。7.7操作过程必须有必要的防护措施以防止操作人员感染，废弃物应作为传染源处理。7.8本产品仅用于体外诊断，供一次性使用，试剂板包装出现漏气或破损一律禁用，稀释液、培养基瓶内出现混浊沉淀等异常现象不得使用。参考文献 [1]Patrick R.Murray,Mannal of clinical Microbiology,7th edition.[2]闻玉梅，现代医学微生物学，第一版，上海医科大学出版社。[3]《全国临床检验操作规程》[4]《Clinical and Laboratory Standards Institute》文件编制人审核人批准人 SSY-LAB-SOP-WSW-104 非发酵菌鉴定及药敏分析测试板标准操作规程版次：1 HMJH-EY-JY-SOP-030 共1页修订：1 鸟氨酸脱羧酶试验标准操作规程 第1页 SSY-LAB-SOP-WSW-012 赖氨酸脱羧酶试验标准操作规程