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萌发小麦淀粉酶酶学性质的研究 Enzymatic properties of the diastase from germinant wheat 专业：制药1201 学号：姓名：杨田华 萌发小麦淀粉酶酶学性质的研究 Enzymatic properties of the diastase from germinant wheat 杨田华 东北农业大学 生命科学学院 摘要：酶的活性通常受温度，PH，以及激活剂和抑制剂的影响。淀粉酶能将淀粉水解，我们可以通过比较酶反应混合物遇到碘所呈现的颜色来判断以上因素对酶活性的影响，酶的催化活性受温度和PH的影响很大，通过实验的现象判定出酶的最适温度和PH，酶的激活剂能增强酶活性，抑制剂能使酶活性降低。由实验结果可得出:α-淀粉酶活性为264.7（麦芽糖 mg?g‐1 鲜重 5min‐1），总淀粉酶活性为295.5（麦芽糖 mg?g‐1 鲜重 5min‐1），酶的最适温度为40℃，最适PH为5.6左右，小麦淀粉酶的激活剂为Nacl，抑制剂为CuSO4。 关键词：淀粉酶；酶活性；温度；PH值；激活剂和抑制剂 前言：淀粉主要存在于植物中，是植物中最主要的储存多糖，尤其是在萌发后的禾谷类种子籽粒中淀粉酶活性更强。淀粉经淀粉酶作用后生成葡萄糖，麦芽糖等小分子物质而被机体利用。淀粉酶主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶两种。α-淀粉酶可随机作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键，生成葡萄糖，麦芽糖，麦芽三糖，糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降低，因此又称为液化酶。β-淀粉酶可以从淀粉的非还原性末端进行水解，每次水解下一分子麦芽糖，又被称为糖化酶。淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。淀粉也是人和动物的重要食物和发酵工业的基本原料。α-淀粉酶是工业生产中应用最为广泛的酶制剂之一，目前，α-淀粉酶已广泛应用于变性淀粉及淀粉糖，等多种行业。 材料与方法 1.1.1实验材料 萌发的小麦 1.1.2主要仪器 电子天平；研钵；离心机；试管；恒温水浴；冰箱。 1.1.3主要试剂 CuSO4溶液（0.3%）；碘液；NaCl溶液；磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液；淀粉溶液。 1.2方法 1.2.1粗酶的提取 称取2g萌发的小麦种子研磨成匀浆，倒入25ml具塞刻度的试管中，用蒸馏水稀释至刻度线处，混匀后在室温下静置，每隔数分钟震荡一次，放置20分钟后，开始离心（4000r/min）10分钟，取上清液（即为淀粉酶粗酶液）备用。 1.2.2淀粉酶活力测定 取六支干净的试管，编号，按下表操作。 操作项目 α-淀粉酶活力测定 总酶活力测定 Ⅰ-1 Ⅰ-2 Ⅰ-3 Ⅱ-1 Ⅱ-2 Ⅱ-3 淀粉酶原液/ml 1.0 1.0 1.0 0 0 0 钝化β-淀粉酶 置70℃水浴15min，冷却 淀粉酶稀释液ml 0 0 0 1.0 1.0 1.0 3,5-二硝基水杨酸/ml 2.0 0 0 2.0 0 0 预保温 将各试管和淀粉溶液置于40℃恒温水浴中保温10min 1%淀粉酶溶液/ml 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 保温 在40℃恒温水浴中准确保温5min 3,5-二硝基水杨酸/ml 0 2.0 2.0 0 2.0 2.0 将各试管摇匀，分别取2ml，放入25ml刻度试管中，再加入2mlDNS试剂混匀，置于沸水浴中煮沸5min，取出冷却，用蒸馏水稀释至25ml混匀，在分光光度计上520nm进行比色测定光密度，记录测定结果。 根据公式 α-淀粉酶活性=[（A-A′）ⅹ样品稀释倍数ⅹ定容体积]/(样品重ⅹC) 总淀粉酶活性=[（B-B′）ⅹ样品稀释倍数ⅹ定容体积]/（样品重ⅹC） α-淀粉酶生成的麦芽糖毫克数（标准曲线） A′- α-淀粉酶对照管 总淀粉酶共同水解淀粉生成的麦芽糖毫克数（标准曲线） B′- 总淀粉酶对照管 比色时所用毫升数 经计算可得：α-淀粉酶活性=264.7（麦芽糖 mg?g‐1 鲜重 5min‐1） 总淀粉酶活性=295.5（麦芽糖 mg?g‐1 鲜重 5min‐1） 2.1温度对淀粉酶活性的影响 取8支试管编号，并记录观察到的颜色 管号 A a B b C c D d 缓冲液（PH5.6）/ml 1 - 1 - 1 - 1 - 淀粉溶液/ml 2.5 - 2.5 - 2.5 - 2.5 - 淀粉酶提取液/ml - 1 - 1 - 1 - 1 预保温/10min 4℃ 室温 40℃ 沸水浴 混合 A倒入a中 B倒入b中 C倒入c中 D倒入c中 酶促反应（10min） 4℃ 室温 40℃ 沸水浴 碘液 各3滴（