4.1.第四章 基因工程的主要技术及其原理 1.ppt

　　1.掌握碱裂解法提取质粒DNA的原理和方法 　　2.掌握总RNA提取及第一链cDNA的合成 3.掌握PCR技术的原理及引物设计的方法 　　4.掌握不同凝胶电泳的差别 　　5.了解PCR技术的种类 　　 核酸提取与纯化的原则 保持核酸分子一级结构的完整性 温度不要过高，核酸提取常常在0～4℃的条件下进行 控制一定的pH值范围(pH值5-9) 保持一定的离子强度 减少物理因素对核酸降解的机械剪切力 防止核酸的生物降解 细胞内或外来的各种核酸酶能消化核酸链中的磷酸二酯键，破坏核酸一级结构。 所用器械和一些试剂需高温灭菌，提取缓冲液中需加核酸酶抑制剂。 核酸提取的一般流程 DNA提取的几种方法 基因组DNA的提取 CTAB法 SDS法 其它 非基因组DNA的提取 质粒DNA的提取 碱裂解法 煮沸法 线粒体、叶绿体DNA的提取 差速离心结合SDS裂解法 基因组DNACTAB法原理（植物DNA提取经典方法） CTAB（十六烷基三甲基溴化铵），是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，并与核酸形成复合物。 该复合物在高盐溶液中是可溶的，通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加