3章 食品检验分析方法4.4节 液相色谱.ppt.pptVIP

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3章 食品检验分析方法4.4节 液相色谱.ppt

* 特点*: 一种通用检测器。它可连续监测参比池与测量池之间折射率之差,能检测出μg/mL的被测组分。 一般不能采用梯度洗提,因为洗脱液组成的任何改变都将有明显的响应。 (2) 差示折光检测器 * 分类: 类型:偏转式检测器和反射式检测器; 偏转式折光检测器的基本原理:  当介质中成分发生变化时,其光的折射率随之发生变化,如入射角不变,则光的偏转角是介质中成分变化的函数。  因此,可以利用折射角偏转值的大小便可测得试样的浓度。 * * 三、高效液相色谱法的应用 1、在食品分析中的应用 (1) 食品营养成分分析:   蛋白质、氨基酸、糖类、色素、维生素、香料、有机酸(邻苯二甲酸、柠檬酸、苹果酸等)、有机胺、矿物质等; (2) 食品添加剂分析:   甜味剂、防腐剂、着色剂(合成色素如柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、亮蓝等)、抗氧化剂等; (3) 食品污染物分析:   霉菌毒素(黄曲霉毒素、黄杆菌毒素、大肠杆菌毒素等)、微量元素、多环芳烃等。 * 2、在环境分析中的应用 环芳烃(特别是稠环芳烃)、农药(如氨基甲酸脂类,反相色谱)残留等。 * 3、在生命科学中的应用 HPLC技术目前已成为生物化学家和医学家在分子水平上研究生命科学、遗传工程、临床化学、分子生物学等必不可少的工具。其在生化领域的应用主要集中于两个方面: (1) 低分子量物质,如氨基酸、有机酸、有机胺、类固醇、卟啉、糖类、维生素等的分离和测定。 (2) 高分子量物质,如多肽、核糖核酸、蛋白质和酶(各种胰岛素、激素、细胞色素、干扰素等)的纯化、分离和测定。 * 4、在医学检验中的应用 主要用于体液中代谢物测定,药代动力学研究,临床药物监测等。 (1) 合成药物:抗生素、抗忧郁药物(冬眠灵、氯丙咪嗪、安定、利眠宁、苯巴比妥等)、黄胺类药 (2) 天然药物生物碱(吲哚碱、颠茄碱、鸦片碱、强心甙)等。 * The End! * 一、概述: 高效液相色谱是在气相色谱和经典色谱的基础上发展起来的。现代液相色谱和经典液相色谱没有本质的区别。不同点仅仅是现代液相色谱比经典液相色谱有较高的效率 和实现了自动化 操作。 高效液相色谱法是继气相色谱之后,70年代初期发展起来的一种以液体做流动相的新色谱技术. 第4.4节 高效液相色谱 * 1、无本质区别 经典液相色谱 现代液相色谱 流动相 在常压下输送 高压输送(4.9×107Pa) 固定相 柱效低 柱效高(特殊方法用小粒径填料填充) 分析周期 长 短 检测器 无 高灵敏度 自动化 无 是 高效液相色谱法(高速液相色谱法、高压液相色谱法) 仅仅是现代液相色谱比经典液相色谱有较高的效率 和实现了自化 操作。 * 高效液相色谱 经典色谱 * 2、高效液相色谱具有以下特点* (与气相色谱比较) 特点 现代液相色谱 气相色谱 目标物 (1) 能测高沸点有机物和无机离子 被测物需气化;在500℃以下工作;难分析M400的有机物 温度 (2) 色谱柱一般可室温工作 精度很高的恒温室或程序升温室 柱效 (3) 柱效高于气相色谱 (柱长一般为50cm左右) 相色谱柱效为2000塔板/m 速度 (4) 分析速度与气相相似 一般1-l0mL/min(几分钟-几十分钟) 柱压 (5) 柱压高于气相色谱(进口压力为150~300kg/cm2) 气源压力最高120kg/cm2,色谱柱压力2kg/cm2,爆炸危险。 灵敏度 (6) 灵敏度与气相色谱相似 高灵敏度检测器 * 二、高效液相色谱仪 流程: 分析前,选择适当的色谱柱和流动相; 开泵,冲洗柱子,待柱子达到平衡且基线平直后; 用微量注射器把样品注入进样口,流动相把试样带入色谱柱进行分离,分离后的组分依次流入检测器的流通池,最后和洗脱液一起排入流出物收集器。 当有样品组分流过流通池时,检测器把组分浓度转变成电信号,经过放大,用记录器记录下来就得到色谱图。 色谱图是定性、定量和评价柱效高低的依据。 * 1、 2、 3、 4、 5、 6、 * 手执控制器 检测器 柱温箱 自动进样器 泵 脱气机 溶剂柜 记录系统 高压输液系统 进样系统 分离系统 检测系统 高效液相色谱仪 * 高压输液系统,进样系统,分离系统和检测系统 * * 1、高压输液泵 高压输液泵要求: 流量恒定、无脉动、有较大的调节范围; 能抗溶剂的腐蚀; 有较高的输出压力; 泵的死体积要小,便于更换溶剂和梯度洗提。 * 工作原理上 可分两大类 恒流泵: 恒压泵: 注射式螺杆泵 机械往复泵 气动放大泵 * (1) 注射式螺杆泵 动力:步进电机 * 主要特点: 压力高(可达150~500kg/cm2),流量稳定,且与外界阻力无关。 主要

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