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荧光素酶报告系统 双荧光素酶报告基因测试∶ 结合萤火虫和海肾荧光素酶的共报告基因测试技术 多克隆位点 技术流程 获得miRNA对应DNA模板 扩增含有靶位点的3’UTR序列 靶序列克隆，构建到荧光素酶表达载体 PCR产物双酶切，连入同样双酶切的载体中，连接产物转化DH5α，阳性克隆鉴定。 荧光素酶活性检测 将miRNA mimics以及荧光素酶报告共转染，检测荧光素酶报告基因 将3’UTR靶位点的种子区进行点突变作为对照，使结果更严谨 实例： 实例： miRNA调节通路的检测 蛋白芯片 Western blot 实例： RNA干扰 RNA干扰（RNA interference，RNAi）是指一种由双链RNA诱发的基因沉默现象，其机制是通过阻碍特定基因的翻译或转录来抑制基因表达。 microRNAs (miRNAs)：mRNA翻译被抑制 short interfering RNAs (siRNAs) ：引起mRNA切割 干扰机制 miRNA简介 microRNAs（miRNAs）是一种小的内源性非编码RNA分子，大约由21－25个核苷酸组成。 通常靶向一个或者多个mRNA，通过翻译水平的抑制调节基因的表达。 动物的靶序列在3’非编码区（3’UTR） 植物的靶序列在编码区或5’UTR miRNA生成 miRNA途径开始于一个miRNA基因的pri-miRNA（primary