第2章生产中常用菌种的分离、选育和保藏.pptVIP

第2章 生产中常用菌种的分离、选育和保藏（screening preservation） ２.１ 菌种的分离简介 （１）菌种的来源 根据资料直接向有科研单位、高等院校、工厂或菌种保藏部门索取或购买； 从大自然中分离筛选新的微生物菌种。 （２）菌种分离思路 ①新菌种的分离是要从混杂的各类微生物中依照生产的要求、菌种的特性，采用各种筛选方法，快速、准确地把所需要的菌种挑选出来。 ②实验室或生产用菌种若不慎污染了杂菌，也必须重新进行分离纯化。 ③有了优良的菌种，还要有合适的工艺条件和合理先进的设备与之配合。 ①定方案：查阅资料，了解所需菌种的生长培养特性。 ②采样：有针对性地采集样品。 ③增殖：人为地通过控制养分或培条件，使所需菌种增殖培养后，在数量上占优势。 ④分离：利用分离技术得到纯种。 ⑤发酵性能测定：进行生产性能测定。这些特性包括形态、培养特征、营养要求、生理生化特性、发酵周期、产品品种和产量、耐受最高温度、生长和发酵最适温度、最适pH值、提取工艺等。 ①　采　样 　采样对象 以采集土壤为主。一般园田土和耕作过的沼泽土中，以细菌和放线菌为主，富含碳水化合物的土壤和沼泽地中，酵母和霉菌较多，如一些野果生长区和果园内。采样的对象也可以是植物，腐败物品，某些水域等。 采样季节 以温度适中，雨量不多的秋初为好。 采土方式 在选好适当地点后，用小萨子除去表土，取离地面5-15cm处的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或塑料袋中，扎好，标记，记录采样时间、地点、环境条件等，以备查考。为了使土样中微生物的数量和类型尽少变化，宜将样品逐步分批寄回，以便及时分离。 ②　增　殖　培　养 通过配制选择性培养基，选择一定的培养条件来控制无关的微生物至少是数量上减少尽量无关的微生物 如：碳源利用的控制，可选定糖，淀粉、纤维素，或者石油等，以其中的一种为唯一碳源，选择利用这唯一碳源才能大量正常生长的微生物，而淘汰其它微生物。 ③　纯　种　分　离 将增殖培养效果显著的优势菌种（混杂生长的微生物）。进—步控制增殖培养的选择性条件，采用划线分离法、稀释分离法等纯化方法获取单菌落 ④　高产菌株的筛选 这一步是采用与生产相近的培养基和培养条件，通过三角瓶的容量进行小型发酵试验，获得适合于工业生产用菌种。 ⑤　毒　性　试　验 自然界的一些微生物是在一定条件下产毒的，将其作为生产菌种应当十分小心，尤其与医药食品工业有关的菌种，更应慎重。据有的国家规定，微生物中除啤酒酵母、脆壁酵母、黑曲霉、米曲霉和枯草杆菌作为食用无须作毒性试验外，其他微生物作为食用，均需通过两年以上的毒性试验。 ２.２ 培养分离 从自然界中分离培养微生物是菌种选育的重要的,基础的步骤。 到目前为止，还没有一种分离培养方法能揭示一个试样中所包含的所有微生物总数和种类。 在任一试样中所存在的微生物仅为极少数特定种类的菌株；在工业微生物筛选过程中，应及时调整检测方法，以与各种不同类型的生长和代谢之微生物相适应。 因此，建立一更为科学的和针对性不强的分离方法是必要的。 (1)成功的分离培养方法 ①认真考它所需产品的特征和生产过程； ②制订初步的筛选标准； ③将生态学方法运用到分离和筛选过程。 (2)培养分离中要解决的问题 ① “分离什么和从哪里分离出?” ②必须充分考虑所分离微生物的生产能力、生长速度、生物群体培养和产品生产工艺及其提纯的难易和费用，工业生产发酵罐中稳定性及遗传操作的难易程度等。 ③选择适宜的培养分离方法和检测方法。 (3)将生态学方法用于培养分离的一般思路要点 ①罗列出所要分离的微生物类群； ②根据所采集样本的各种生态参数，描述所要分离的微生物之生态系统或栖息地： ③将若干样本分成若干类型，如植物和植物各部，土壤(类型和土层)、岩石、水、昆虫和发酵食品等； ④罗列出所要考察和测量的环境参数，如pH、盐分、水分、氧化还原电势及温度等； ⑤列出生物系统中有用的自然底物，如森林土壤中的几丁质、葡萄表皮的果胶； ⑥根据上述1-5项中所获得的数据，设计分离方法，即选择适宜的稀释液、底物、试样、天然浸出汁和培养条件； ⑦用标准方法作对照来评价生态学分离方法； ⑧根据待检材料的生态参数需要，修改已知的方法； ⑨运用特定的富集方法，富集那些可能具有筛选意义的微生物类群。 ① 采样和采集方法 为了从一特定生态系统中分离出具有代表性的细菌菌群，特别是分离那些在唯一微环境区域中出现的菌群时，必须十分重视样本的采集。 样本采集时所需的工具通常有无菌刮铲、土样采集器、镊子、解剖刀、手套、无菌小塑料袋和塑料瓶等。 ②采样的注意事项 采样时应尽可能保持相对无菌； 所采集的样本必须具有某种代表性； 采好的样必