结核分枝杆菌特异性抗检测的研究现状及展望.doc

结核分枝杆菌特异性抗原检测的研究现状及展望 【关键词】 分枝杆菌;结核；抗原；检测 　　结核病的实验室诊断技术主要包括细菌学、免疫学和分子生物学等三大领域的诊断方法。与细菌学和分子生物学技术相比，免疫学诊断技术同时兼具简便、快速、价廉、无需贵重仪器、容易在基层实验室推广等优势，因此，长期以来一直是结核病研究人员重点关注并且坚持不懈努力的研究方向。结核病免疫学诊断分为两个类型：①依据机体对病原菌——结核分枝杆菌（MTB）诱发的免疫应答反应进行检测，又分为体液免疫检测和细胞免疫检测两个方面；②针对病原菌 MTB 的特异性抗原进行检测。由于机体受到MTB感染后，体内首先出现的是结核分枝杆菌特异性抗原，并且结核抗原的检测可以作为结核杆菌存在的直接证据，可以避免结核病患者由于免疫应答低下导致的体液免疫检测或细胞免疫检测的“假阴性”，因此检测结核分枝杆菌特异性抗原更有可能发展成为结核病早期、快速、敏感、特异，并且适宜在发展中国家推广应用的新型诊断方法，因而也越来越受到人们的重视。现就结核分枝杆菌特异性抗原检测的研究进展做一综述。 　　1 结核分枝杆菌特异性抗原检测的技术方法 　　1.1 凝集试验（Agglutination test）　　Krambovitis等［1］于1984年首次报道了胶乳凝集试验（LPT）在结核病诊断的中的应用。作者通过纯化兔抗结核分枝杆菌胞膜抗原免疫球蛋白致敏乳胶颗粒，检测脑脊液（CSF），观测凝集发生与否诊断结核性脑膜炎。Cambiaso 等［2］通过将牛分枝杆菌（Mycobacterium bovis） 抗体（Fab）2 连接乳胶颗粒，对组织液标本中的结核抗原进行检测，较大地提高了检测敏感性。Chandramuki 等［3］ 应用反向间接血凝试验（RIHG）对结核性脑膜炎CSF中结核抗原检测进行了探索。 　　1.2 酶联免疫吸附试验（ELISA） 　　Sada等［4］于1983年首次建立了双抗体夹心ELISA（s ELISA）检测CSF中结核抗原，取得了较为理想的的检测结果。其后国内外众多学者应用不同形式的 ELISA 方法对结核分枝杆菌特异性抗原检测进行了探索。与凝集试验相比，ELISA检测结果的敏感性和特异性都有一定的提高。 　　1.3 免疫斑点法(Dot immunobinding assay, Dot－Iba) 　　Dot－Iba 是20世纪80年代中期发展起来的固相标记免疫测定技术。其技术原理接近ELISA方法，只是将抗原包被于固相的硝酸纤维素膜上，通过相应的抗体特异性吸附，洗涤，最后应用酶标二抗检测。与ELISA法相比，Dot－Iba操作更为简单，所需试剂少，结果肉眼即可判读，检测结果还可常时间保存，不需特殊设备，易于普及和推广。Sumi 等［5］ 于1999年应用Dot-Iba 技术对结核性脑膜炎患者CSF 中的结核杆菌抗原进行了研究报道。 　　1.4 免疫金标技术 　　(Immunogold labelling techique) 该技术是20世纪80年代中后期发展的一种新型免疫学标记和检测技术，目前在医学检验中的应用主要是免疫金标层析法（Immunochromatography）和免疫金标渗滤法 (Dot-immuogold filtration assay，DIGFA)。免疫金标技术是在Dot－Iba检测原理的基础上进一步发展，但应用胶体金标记替代了酶标记，利用金颗粒具有高电子密度的特性，当标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼即可见红色或粉红色斑点，因而可以用于定性或半定量检测。与ELISA和Dot-Iba技术相比，其操作更为简便、快速，可将常规ELISA检测所需的操作时间由2～4h缩短至5～15min，且检测的敏感性和特异性保持不变。Stavri［6］于2003年首先应用DIGFA技术检测了结核病患者血清和痰液中的结核抗原。 　　2 结核分枝杆菌特异性靶抗原的选择及特性 　　2.1 菌体细胞 　　通过将结核分枝杆菌减毒株H37Ra，或BCG株进行超声破碎，应用抽提物直接免疫动物，获得anti-H37Ra 或 anti-BCG血清，用以做为待检抗原的捕获抗体。Sada等［4］首先以ELISA双夹心法检测结核病患者CSF中的BCG抗原，在4例细菌学肯定的结核性脑膜炎，12例临床诊断而无细菌学证据者CSF中，BCG抗原阳性者各为4/4例及9/12例，11例对照组均检测阴性。检测的敏感性为81.25％，特异性为95％。Srivastava等［7］应用Dot-Iba 检测50例结核性脑膜炎患者与48例对照患者CSF中的 H37Rv抗原，其敏感性为90.0％，特异性为95.8％，比较了ELISA法检测CSF中抗H37Rv抗体（敏感性为74％，特异性为89.6％）和血清中结核杆菌抗H37Rv抗体（敏感